大肠杆菌转化实验
大肠杆菌转化实验
下面喆图小编为大家介绍使用恒温培养箱做大肠杆菌转化实验。
大肠杆菌转化：（1）将重组dna分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。热击法： 实验方法原理：质粒dna或重组dna粘附在细菌细胞表面，经过42°c短时间的热击处理，促进吸收dna.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。
实验步骤：
一、实验材料准备
1.器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，恒温水浴锅，制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体lb-amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
2.试剂 培养基（不加抗菌素），lb培养基（加抗菌素），无菌ddh2o，iptg，x-gal。3.材料处理 无菌ddh2o，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%iptg（m/v），2%x-gal（m/v，用n,n-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步骤
1.事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2.从-70℃超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。
3.加入5μl连接好的质粒混合液（dna含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。
4.轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5min。
5.在超净工作台中向上述各管中分别加入500μllb培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1h。
6.在超净工作台中取上述转化混合液100-300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体lb平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7.如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl2%x-gal，8μl20%iptg，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8.在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9.在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。 10.观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
注意事项：1.玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂。
详情可咨询喆图客服。（恒温摇床、恒温水浴锅、恒温培养箱）
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实验步骤：
一、实验材料准备
1.器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，恒温水浴锅，制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体lb-amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
2.试剂 培养基（不加抗菌素），lb培养基（加抗菌素），无菌ddh2o，iptg，x-gal。3.材料处理 无菌ddh2o，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%iptg（m/v），2%x-gal（m/v，用n,n-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步骤
1.事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2.从-70℃超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。
3.加入5μl连接好的质粒混合液（dna含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。
4.轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5min。
5.在超净工作台中向上述各管中分别加入500μllb培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1h。
6.在超净工作台中取上述转化混合液100-300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体lb平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7.如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl2%x-gal，8μl20%iptg，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8.在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9.在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。 10.观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
注意事项：1.玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂。
详情可咨询喆图客服。（恒温摇床、恒温水浴锅、恒温培养箱）
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