免疫荧光 (IF)介绍
免疫荧光是一种免疫染色技术，可使用荧光显微镜观察样品中的抗原。使用有机溶剂和化学交联剂仔细固定样品，以保持其细胞完整性以及亚细胞结构。然后对它们进行透化以进行免疫染色，然后进行封闭以尽量减少非特异性结合。然后用抗体对样品进行免疫染色，并通过荧光反应使目标颜色可视化。
材料
10x pbs：要制备 1l，将 80g nacl、2g kcl、2g kh2po4 和 28.5g nahpo4 添加到 1l 注射用水中。将 ph 值调整至 7.4。
4% 聚甲醛：要制备 100ml，将 4g 聚甲醛添加到 100ml 1×pbs 中。将 ph 值调整至 7.4。
1×pbs/0.2% triton x-100(pbs/triton)：要制备 500ml，将 1ml triton x-100 添加到 500ml 1× pbs 中。
1×pbs/3% bsa(pbs/bsa)：配制100ml时，将3g bsa加入到100ml 1×pbs中。
协议
准备 固定 透化
在 pbs 中短暂冲洗细胞。
吸出pbs，用4%聚甲醛覆盖细胞至2-3mm深度约200ul。
让细胞在室温下固定 15 分钟。
吸出固定液，用 pbs 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
吸出pbs，用pbs/triton在室温下将细胞覆盖至2-3mm深度约200ul 5分钟。
吸出渗透剂在 pbs 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
免疫染色
将 200ul 用 pbs/bsa 稀释的一抗轻轻添加到 24 孔板的每孔中。
37℃ 孵育 60 分钟或 4℃ 过夜。
吸出稀释的一抗，然后在 pbs 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
将用 pbs/bsa 稀释的荧光染料偶联二抗加入到 24 孔板中，每孔 100ul，室温避光孵育 30 分钟。
吸出稀释的荧光染料偶联二抗，然后在 pbs 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
在荧光显微镜下测试。
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4% 聚甲醛：要制备 100ml，将 4g 聚甲醛添加到 100ml 1×pbs 中。将 ph 值调整至 7.4。
1×pbs/0.2% triton x-100(pbs/triton)：要制备 500ml，将 1ml triton x-100 添加到 500ml 1× pbs 中。
1×pbs/3% bsa(pbs/bsa)：配制100ml时，将3g bsa加入到100ml 1×pbs中。
协议
准备 固定 透化
在 pbs 中短暂冲洗细胞。
吸出pbs，用4%聚甲醛覆盖细胞至2-3mm深度约200ul。
让细胞在室温下固定 15 分钟。
吸出固定液，用 pbs 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
吸出pbs，用pbs/triton在室温下将细胞覆盖至2-3mm深度约200ul 5分钟。
吸出渗透剂在 pbs 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
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将 200ul 用 pbs/bsa 稀释的一抗轻轻添加到 24 孔板的每孔中。
37℃ 孵育 60 分钟或 4℃ 过夜。
吸出稀释的一抗，然后在 pbs 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
将用 pbs/bsa 稀释的荧光染料偶联二抗加入到 24 孔板中，每孔 100ul，室温避光孵育 30 分钟。
吸出稀释的荧光染料偶联二抗，然后在 pbs 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
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