你需要知道的层析柱知识
收好这一份层析柱使用指南，帮您在实验过程中从容应对各种突发状况，更好的完成实验操作。
1.层析柱进气泡怎么办？
空气进入，如缓冲液走空，连接进入系统过程中
○用纯水反向冲洗，如果有柱位阀可直接切换流向，没有的话可将柱子反接
○对于大多数层析柱来说可用乙醇冲洗，以提高排气效率
缓冲液中有气泡
○上柱前将缓冲液脱气
○在缓冲液入口使用空气感应器
温度影响，如在冷室操作后马上在室温操作，或低温缓冲液直接在室温使用
○将缓冲液在使用前达到热平衡
2.层析柱干了还可以再使用吗？
○通常不可以，但也取决于具体的纯化需求。
3.胶平面与柱头有间隙怎么办？
由于不当装填或者筛网孔径与填料粒径不匹配，导致填料漏出
○更换筛网，重新装填，层析柱堵塞，导致反压增大
○根据说明书清洗
○更换滤膜
○样品上柱前先澄清
柱床装填太差，装柱过程中未有效压缩填料
○调整柱头高度，测柱效填料被用于条件，如有机溶剂
○检查缓冲液，选择合适的缓冲液条件
4.怎样避免由于样品导致的压力增大？
颗粒性物质——堵塞滤膜和层析柱
○对于滤膜吸附较高的的样品，体积较小时，可以用离心代替过滤，比如10000g离心15分钟
○细胞裂解液可50000g离心30分钟
○可以使用醋酸纤维素膜或者pvdf膜，其对蛋白的非特异性吸附较低
○选择合适孔径的滤器
沉淀或者聚体堵塞层析柱
○过滤
○通过改变ph，加盐或添加剂稳定样品或减少聚体产生
○避免机械压力和过高的蛋白浓度
核酸——过高粘度可能会封闭填料上的配基
○加入核酸酶
○使用*，聚乙烯亚胺或硫酸*沉淀
脂类——可能封闭填料上的配基或堵塞滤膜和层析柱
○离心
○使用硫酸铵，硫酸葡聚糖或pvp沉淀
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