4-香豆酸：辅酶A连接酶（4CL）活性检测试剂盒（微量法）
4-香豆酸：辅酶a连接酶（4cl）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：ba1006
产品规格：100管/96样
产品简介
4-香豆酸：辅酶a连接酶（4-coumarate:coa ligase，4cl）是木质素生物合成的关键酶之一，主要催化肉桂酸及其羟基或者甲氧基衍生物生成相应的辅酶a酯，这些中间产物随后进入苯丙类衍生物支路合成途径。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。
4cl催化4-香豆酸和coa生成4-香豆酸coa，其在333nm下测有特征吸收峰，测定4-香豆酸coa的生成速率，即可反应4cl活性。
产品内容：
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体60ml×2瓶
4℃
试剂一
液体15ml×1瓶
4℃
试剂二
粉剂×1瓶
-20℃
试剂三
液体3ml×1瓶
4℃
试剂四
粉剂×1瓶
-20℃
试剂五
粉剂×1支
4℃
溶液的配制：
1.提取液：内含不溶物，使用前摇匀；
2.试剂二：临用前加入3ml蒸馏水溶解，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融；
3.试剂四：临用前用4ml蒸馏水溶解备用，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融；
4.试剂五：加入1ml蒸馏水溶解，临用前用蒸馏水稀释40倍后备用，现用现配；
5.工作液的配制：按体积比将试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=1:1:1:1的比例配制工作液，现用现配。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1ml石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤（仅供参考）：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至333nm，蒸馏水调零。
2.操作表（在0.5ml ep管中进行下列操作）：
试剂名称（µl）
测定管
空白管
样本
20
-
蒸馏水
-
20
工作液
80
80
试剂一
100
100
充分混匀后测定333nm下的初始值a1，37℃反应30min后再次测定吸光值a2，计算δa 测定管=a2测定管-a1测定管，δa空白管= a2空白管-a1空白管，δa=δa测定管-δa空白管。
三、4cl活计算
a、按微量石英比色皿计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/mg prot）=[δa×v反总÷（ε×d）×109 ]÷(v样×cpr) ÷t
=15.87×δa÷cpr
2.按样本质量计算：
单位定义：每g组织每分钟生成1nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/g质量）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(w×v样÷v样总) ÷t
=15.87×δa÷w
3.按细菌或细胞数量计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/104cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(500×v样÷v样总) ÷t
=0.03174×δa
v反总：反应体系总体积，2×10-4 l；ε：4-香豆酸辅酶a摩尔消光系数，2.1×104l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.02ml；v样总：加入提取液体积，1ml；t：反应时间，30min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
b、按96孔uv板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔uv板光径）进行计算即可。
注意事项：
1.若δa大于0.5，将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
2.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
3.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
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产品规格：100管/96样
产品简介
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4cl催化4-香豆酸和coa生成4-香豆酸coa，其在333nm下测有特征吸收峰，测定4-香豆酸coa的生成速率，即可反应4cl活性。
产品内容：
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体60ml×2瓶
4℃
试剂一
液体15ml×1瓶
4℃
试剂二
粉剂×1瓶
-20℃
试剂三
液体3ml×1瓶
4℃
试剂四
粉剂×1瓶
-20℃
试剂五
粉剂×1支
4℃
溶液的配制：
1.提取液：内含不溶物，使用前摇匀；
2.试剂二：临用前加入3ml蒸馏水溶解，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融；
3.试剂四：临用前用4ml蒸馏水溶解备用，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融；
4.试剂五：加入1ml蒸馏水溶解，临用前用蒸馏水稀释40倍后备用，现用现配；
5.工作液的配制：按体积比将试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=1:1:1:1的比例配制工作液，现用现配。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1ml石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤（仅供参考）：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至333nm，蒸馏水调零。
2.操作表（在0.5ml ep管中进行下列操作）：
试剂名称（µl）
测定管
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样本
20
-
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-
20
工作液
80
80
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100
100
充分混匀后测定333nm下的初始值a1，37℃反应30min后再次测定吸光值a2，计算δa 测定管=a2测定管-a1测定管，δa空白管= a2空白管-a1空白管，δa=δa测定管-δa空白管。
三、4cl活计算
a、按微量石英比色皿计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
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4cl（u/mg prot）=[δa×v反总÷（ε×d）×109 ]÷(v样×cpr) ÷t
=15.87×δa÷cpr
2.按样本质量计算：
单位定义：每g组织每分钟生成1nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/g质量）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(w×v样÷v样总) ÷t
=15.87×δa÷w
3.按细菌或细胞数量计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/104cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(500×v样÷v样总) ÷t
=0.03174×δa
v反总：反应体系总体积，2×10-4 l；ε：4-香豆酸辅酶a摩尔消光系数，2.1×104l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.02ml；v样总：加入提取液体积，1ml；t：反应时间，30min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
b、按96孔uv板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔uv板光径）进行计算即可。
注意事项：
1.若δa大于0.5，将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
2.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
3.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
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Ziehl-Abegg轴流风机的产品分类
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