在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等,
1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择c18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱
2.如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择cn,nh2,或硅胶柱,hilic(亲水色谱),也有使用c18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱(缺点是离子对试剂平衡时间长,对流动相ph要求比较精密,否则很难重复实验,另外离子对试剂很难洗下来,基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验)
3.若样品是碱性的;可选择高纯硅胶柱(高纯硅胶缺少金属杂质,且硅胶端基封尾)或一些经过修饰的c18柱(如极性嵌入技术或碱去活技术等),他们都会减少碱性化合物的拖尾,一般会选择中性或偏碱的条件下做,因为这样可增加碱性样品的保留
4.如果碱性化合物的极性太强,或碱性太强;可以选择宽ph的c18色谱柱在高ph值检测(优点是方法开发简单,缺点是目前实现这一技术的色谱柱品牌比较少,价格也高)或者选用hilic色谱柱(硅胶柱在反相条件下使用,这也是很经典的检测碱性样品的方法)选择强离子交换柱(缺点是不能用来分析其它样品,对流动相ph要求比较精密,否则很难重复实验)也有使用c18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。
影响因素
a:物理因素1.硅胶纯度----·填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
2.色谱柱尺寸---填料床的长度和内径
3.颗粒形状------球型或不规则型
4.粒径------------平均颗粒直径,通常3-10µm
5.表面积---------颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/gram表示
6.孔径------------颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围80-300å
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