耐热dna聚合酶多应用在pcr技术中。各种耐热dna聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除 错配,切 平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障碍。由于上述这些不同,可以将耐热dna聚合酶分为三类,下面远慕生物简单介绍一下。
一、普通耐热dna聚合酶
taq dna 聚合酶
由一种水生栖热菌yt1株分离提取出,是发现的耐热dna聚合酶中活性最高的一种,达200,000单位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。
taqdna聚合酶还要具有非模板依赖性活性,可将pcr双链产物的每一条链3'加入单 核苷酸尾,故可使pcr产物具有3'突出的单a核苷酸尾;另一方面,在仅有dttp存在时,它可将 平端的 质粒的3'端加入单t核苷酸尾,产生3'端突出的单t核苷酸尾。应用这一特性,可实现pcr产物的 t-a克隆法。
tth dna 聚合酶
从thermus thermophilus hb8中提取而得,该酶在高温和mncl2条件下,能有效地 逆转录rna;当加入mg2+后,该酶的聚合活性大大增加,从而使cdna合成与扩增可用一种酶催化。
二、高保真dna聚合酶
pfu dna 聚合酶
是从pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高温dna聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正 pcr扩增过程中产生的错误,使产物的 碱基 错配率极低。pcr产物为 平端,无3'端突出的单a核苷酸。
vent dna 聚合酶
该酶是从litoralis栖热球菌中分离出的,不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可以去除错配的碱基,具有校对功能。
三、dna序列测定中应用的耐热dna聚合酶
测序级taqdna聚合酶
是在taqdna聚合酶的基础上对它进行修饰,去除5'-3'外切酶活性,保证测序记过的高度准确性,可产生强度均一的测序条带,背景清晰。
bca best dna 聚合酶
从bacillus caldotenax yt-g菌株中提纯,并使其5'-3'外切酶活性缺失的dna聚合酶。它的伸长性能优越;可抑制 dna二级结构形成,可以得到均一的dna测序带。
sac dna 聚合酶
从酸热浴流化裂片菌中分离,无3'-5'外切酶活性,可用于dna 测序,但测序反应中ddntp/dntp的比率要高。
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