液体双试剂与其它类型试剂比较具有液体试剂和双试剂的优点。
(一)提高了抗干扰反应的能力
在临床生化测定过程中,血标本除了含有待测物质外,还含有各种酶、有机物、无机盐等物质,
这些物质都会干扰或参与测试反应,引起非特异性反应干扰,而双试剂型试剂盒设计的一个主要目
的就是为了克服这种干扰反应。在测定过程中,首先让试剂ⅰ与标本中的干扰物质反应,反应 5
分钟后,再用试剂ⅱ启动真正的测试反应,从而使测定结果更加准确。
例如:尿素氮的酶法测定。此测定通过二步化学反应来完成。
在 340nm 下监测吸光度值的变化,与同样处理的尿素标准液比较,计算出样品尿素含量。这
一反应的步特异性高,脲酶只对样品中的尿素起催化作用,但第二步反应就存在一些干扰:样
品中(如血清、尿液)含有 nh4,(内源性 nh4)会消耗 nadh,使测定结果偏高;复溶试剂时所
用蒸馏水如果含有 nh4 或者所用器材不够清洁被 nh4 污染(外源性 nh4)也会消耗 nadh,使测
定结果偏高;当样品中(如血清)含有较高的丙酮酸时,血清中的乳酸脱氢酶会催化下列反应:
ldh
单一试剂型试剂测定尿素时存在内源性 nh4、外源性 nh4 和内源性丙酮酸的干扰,使测定结果产
生正误差。
测定尿素的酶法双试剂(液体型)试剂盒有两个试剂,均为液体,不必复溶。试剂含α—
酮戊二酸、nadh、*脱氢酶及维持 ph 的缓冲物质。第二试剂含脲酶、nadh、α—酮戊二
酸。当被检样品加入试剂在 37℃作用 5 分钟,将内源 nh4、外源性 nh4 及内源性丙酮酸消耗 。 接 着 加 入 第 二 试 剂 使 样 品 中 的 尿 素 被 脲 酶 水 解 成 nh4 , 再 进 行 第 二 步 反 应 ,
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了尿素测定的准确性。
再如:目前在临床化学检测中用的较为普遍的指示反应 trinder 反应(主要用于代谢产物的测
定,如葡萄糖、尿酸、甘油三脂、*、hdl),此指示反应的特异性较差,受到血标本中的胆
红素、抗坏血酸的干扰,导致结果的阴性偏差。其中为了克服*的干扰,国内外部分试剂已通
过加入铁qing化钾、调整显色剂改变测定波长来排除*的干扰,而抗坏血酸的影响和干扰一直较
难克服,从面影响了测定结果。液体双试剂(包括甘油三脂、*、hdl、尿酸、肌酐)在试
剂 i 中加入了抗坏血酸氧化酶,当标本和试剂 i 先反应,便可克服标本抗坏血酸的干扰,当抗干扰
反应完毕后,再加入试剂ⅱ启动反应,从而使得整个反应的特异性大大提高,准确度也相应提高。
另外,常见的干扰是黄疸。有的测定试剂中加有*氧化酶,先作用黄疸血清使其氧化无
色,而后再加反应试剂完成反应测定,消除黄疸的影响。
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