新生牛血清的制备方法分享
新生牛血清（newborncalfserum，简称nbcs）是从新出生的小牛提取的一种重要血清，通常被用于体外细胞培养中作为营养成分和添加剂。
1、原料准备
（1）小牛：在小牛出生10-14天后采集。
（2）血液收集袋：可购买商业收集袋或使用专门工具进行采集。
（3）无菌器具：包括采集针和注射器、收集袋接头、离心机及离心管等。
（4）消毒液和生物安全柜。
2、制备步骤
步骤一：收集血液
（1）确保所有器具消毒，并在生物安全柜中进行操作。
（2）小牛静脉采血，使用消毒过的注射器将血液直接收集到血液收集袋中。
（3）一旦血液收集完毕，利用无菌的接头连接收集袋和离心管。离心大约15分钟，以沉淀红细胞。
（4）使用无菌的移液管或注射器抽取上清部分并放入新的无菌离心管中。
（5）离心新的离心管以去除任何剩余的红细胞或其他固体物质。
步骤二：灭菌
（1）通常情况下，将离心后获得的上清部分放在70度的水浴中暴露24h以上进行热灭菌。
（2）如果热灭菌不可能，可选择用0.1%乙烯氧化物在37°c温度下经过8-12小时进行化学灭菌处理。
步骤三：过滤
（1）取出灭菌后的血清上清并过滤。通常使用0.22微米的无菌过滤器进行过滤。可以通过真空过滤或压力过滤来增加速度和效率。
（2）将过滤的血清装入小容器中，如一次性离心管。
步骤四：提取
（1）放置血清在4度恒温上，持续至少12小时使得血清降解，分为上层油状物及下层水状物。
（2）用无菌工具将上层油状物与下层水状物分开，取出上层的油状物放置于无菌平板上，进行再次烘干，过夜在4摄氏度下保存即可。
总之，制备新生牛血清的方法并不复杂，但需要讲究卫生与固定操作流程。做好以上操作步骤和技巧，并准确添加葡萄糖、抗生素及其他营养物质后，就可以获得具有良好活力、稳定性和纯度的高质量nbcs。
关键词：离心机 消毒液 生物安全柜 安全柜
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（3）无菌器具：包括采集针和注射器、收集袋接头、离心机及离心管等。
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（1）确保所有器具消毒，并在生物安全柜中进行操作。
（2）小牛静脉采血，使用消毒过的注射器将血液直接收集到血液收集袋中。
（3）一旦血液收集完毕，利用无菌的接头连接收集袋和离心管。离心大约15分钟，以沉淀红细胞。
（4）使用无菌的移液管或注射器抽取上清部分并放入新的无菌离心管中。
（5）离心新的离心管以去除任何剩余的红细胞或其他固体物质。
步骤二：灭菌
（1）通常情况下，将离心后获得的上清部分放在70度的水浴中暴露24h以上进行热灭菌。
（2）如果热灭菌不可能，可选择用0.1%乙烯氧化物在37°c温度下经过8-12小时进行化学灭菌处理。
步骤三：过滤
（1）取出灭菌后的血清上清并过滤。通常使用0.22微米的无菌过滤器进行过滤。可以通过真空过滤或压力过滤来增加速度和效率。
（2）将过滤的血清装入小容器中，如一次性离心管。
步骤四：提取
（1）放置血清在4度恒温上，持续至少12小时使得血清降解，分为上层油状物及下层水状物。
（2）用无菌工具将上层油状物与下层水状物分开，取出上层的油状物放置于无菌平板上，进行再次烘干，过夜在4摄氏度下保存即可。
总之，制备新生牛血清的方法并不复杂，但需要讲究卫生与固定操作流程。做好以上操作步骤和技巧，并准确添加葡萄糖、抗生素及其他营养物质后，就可以获得具有良好活力、稳定性和纯度的高质量nbcs。
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