紫外分光光度法测定蛋白质含量方法
1. 实验部分
1.1 仪器与试剂：
labtech uv power紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝g250；
牛血清蛋白；*纯水。
1.2 试液的制备：
牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入*纯水溶解并定容。
考马斯亮兰g250试剂 称取100mg考马斯亮兰g250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。
2. 结果与讨论
2.1 校正曲线的绘制
准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用*纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰g250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度
为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为a=0.613556c+0.001008，r=0.9994。
2.2 精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。
表1 精密度测定结果
次数
1
2
3
4
5
6
rsd%
a
0.2626
0.2622
0.2620
0.2628
0.2629
0.2626
0.13
2.3 稳定性
取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。
表2 稳定度测定结果
时间（min）
a1
a2
a3
a平均
0
0.5511
0.5523
0.5516
0.5517
10
0.5204
0.5184
0.5168
0.5185
20
0.4910
0.4901
0.4903
0.4905
30
0.4765
0.4716
0.4721
0.4734
40
0.4524
0.4475
0.4440
0.4480
50
0.3982
0.3935
0.4031
0.3983
3. 结论
该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法
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1.2 试液的制备：
牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入*纯水溶解并定容。
考马斯亮兰g250试剂 称取100mg考马斯亮兰g250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。
2. 结果与讨论
2.1 校正曲线的绘制
准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用*纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰g250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度
为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为a=0.613556c+0.001008，r=0.9994。
2.2 精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。
表1 精密度测定结果
次数
1
2
3
4
5
6
rsd%
a
0.2626
0.2622
0.2620
0.2628
0.2629
0.2626
0.13
2.3 稳定性
取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。
表2 稳定度测定结果
时间（min）
a1
a2
a3
a平均
0
0.5511
0.5523
0.5516
0.5517
10
0.5204
0.5184
0.5168
0.5185
20
0.4910
0.4901
0.4903
0.4905
30
0.4765
0.4716
0.4721
0.4734
40
0.4524
0.4475
0.4440
0.4480
50
0.3982
0.3935
0.4031
0.3983
3. 结论
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