溶出性抗菌织物抗（抑）效果浸渍试验
1 原 理
将试样和对照织物分别放于三角瓶中，用含有肉汤培养基的试验菌悬液接种于试样和对照织物上，经培养后，分别将培养前后试样上的细菌洗下，测定细菌的数量，可计算出试样上细菌减少的百分率。该方法适用于溶出性抗菌织物抗（抑）效果的检测。
2 实验器材
（1）实验菌株 *（atcc 6538）
（2）试样 在距试样布边 10cm 以上、离布端 1m 以上部位，剪取直径为 5cm 的圆形试样若干（需用试样数量要根据纤维类别及织物织法而定，以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留残液为度）。另同法剪取对照织物若干，取 3 份试样和 2 份对照织物分别装于三角瓶中，盖好瓶口，121℃ 15min灭菌备用
（3）肉汤培养基
（4）胰蛋白胨大豆琼脂培养基
（5）磷酸盐缓冲液（pbs，0.03mol/l，ph为7.2～7.4）
（6）恒温水浴箱
（7）37℃培养箱
3 菌悬液的制备
用接种环将保存的菌种以划线法接种到营养琼脂平皿上，在 37℃恒温培养箱中培养 24h，取平皿上典型的菌落移种到含肉汤培养基的三角瓶中，在 37℃条件下培养 24h，用肉汤对培养液进行系列稀释，使菌悬液的含菌量为 1×105cfu/ml～5×105cfu/ml。
4 试验步骤
（1）分别取 1ml 菌悬液加在 3 份准备好的三角瓶内的织物上，确保其均匀分布，且三角瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸发。
（2）分别在一个盛有试样和对照织物的三角瓶中加入 100ml 缓冲液，剧烈摇晃 1min 洗涤细菌，取 1ml 做系列1 0倍稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为“0”接触时间样品和对照织物上的细菌数。
（3）将另一个装有接种试样的三角瓶在 37℃恒温培养箱中培养 20h±2h，然后加入 100ml缓冲液，剧烈摇晃 1min 洗涤细菌，取 1ml 做系列10倍稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为试验组。
（4）试样不接种菌悬液，在“0”接触时间加入 100ml 缓冲液，剧烈摇晃 1min 取样，接种平皿，作为阴性对照组。
（5）另取1个装有对照织物的三角烧瓶，接种 1ml 菌悬液后，在 37℃ 恒温培养箱中培养20h±2h，然后加入 100ml 缓冲液，剧烈摇晃 1min 洗涤细菌，取 1ml 做系列10倍稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为阳性对照组。
（6）将阴性和阳性对照样本与试验组样本一并放入 37℃恒温培养箱中培养48h，计数菌落数。
（7）试验重复3次。
（8）结果计算
b或c或（b＋c）/2-a
抑菌率（%）= ×100
b或c或（b＋c）/2
试验组试样上的细菌数； “0”接触时间试样上的细菌数；
“0”接触时间对照织物上的细菌数；
如果“b”和“c”差别较大时，取较大值；如果“b”和“c”差别不大时，取平均值。
5 评价规定
“0”接触时间对照织物的平均菌落数应在 1×103cfu/ml～5×103cfu/ml。 阴性对照应无菌生长，阳性对照菌数比“0”接触时间的菌数明显增加。 各次试验的抑菌率均≥50%，即判定该样片具有抗菌作用。
6 注意事项
对织物进行染菌操作时，应确保其均匀分布，且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。 三角瓶内的织物染菌后，应将瓶口封好，以防液体蒸发，造成细菌死亡。
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（2）试样 在距试样布边 10cm 以上、离布端 1m 以上部位，剪取直径为 5cm 的圆形试样若干（需用试样数量要根据纤维类别及织物织法而定，以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留残液为度）。另同法剪取对照织物若干，取 3 份试样和 2 份对照织物分别装于三角瓶中，盖好瓶口，121℃ 15min灭菌备用
（3）肉汤培养基
（4）胰蛋白胨大豆琼脂培养基
（5）磷酸盐缓冲液（pbs，0.03mol/l，ph为7.2～7.4）
（6）恒温水浴箱
（7）37℃培养箱
3 菌悬液的制备
用接种环将保存的菌种以划线法接种到营养琼脂平皿上，在 37℃恒温培养箱中培养 24h，取平皿上典型的菌落移种到含肉汤培养基的三角瓶中，在 37℃条件下培养 24h，用肉汤对培养液进行系列稀释，使菌悬液的含菌量为 1×105cfu/ml～5×105cfu/ml。
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（1）分别取 1ml 菌悬液加在 3 份准备好的三角瓶内的织物上，确保其均匀分布，且三角瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸发。
（2）分别在一个盛有试样和对照织物的三角瓶中加入 100ml 缓冲液，剧烈摇晃 1min 洗涤细菌，取 1ml 做系列1 0倍稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为“0”接触时间样品和对照织物上的细菌数。
（3）将另一个装有接种试样的三角瓶在 37℃恒温培养箱中培养 20h±2h，然后加入 100ml缓冲液，剧烈摇晃 1min 洗涤细菌，取 1ml 做系列10倍稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为试验组。
（4）试样不接种菌悬液，在“0”接触时间加入 100ml 缓冲液，剧烈摇晃 1min 取样，接种平皿，作为阴性对照组。
（5）另取1个装有对照织物的三角烧瓶，接种 1ml 菌悬液后，在 37℃ 恒温培养箱中培养20h±2h，然后加入 100ml 缓冲液，剧烈摇晃 1min 洗涤细菌，取 1ml 做系列10倍稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为阳性对照组。
（6）将阴性和阳性对照样本与试验组样本一并放入 37℃恒温培养箱中培养48h，计数菌落数。
（7）试验重复3次。
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b或c或（b＋c）/2-a
抑菌率（%）= ×100
b或c或（b＋c）/2
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“0”接触时间对照织物上的细菌数；
如果“b”和“c”差别较大时，取较大值；如果“b”和“c”差别不大时，取平均值。
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6 注意事项
对织物进行染菌操作时，应确保其均匀分布，且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。 三角瓶内的织物染菌后，应将瓶口封好，以防液体蒸发，造成细菌死亡。
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