乙醇固定样品DNA抽提和直接PCR实验
实验概要
本实验从乙醇浸泡的鱼苗中提取dna，并利用直接pcr进行了鉴定。
实验原理
在实际的研究工作中，野外取样的地点一旦较为偏远，受条件的限制，很难保证得到的样品活体或能够快速冷冻；另外，对一些稀有物种和濒危种，鲜活样品的采集十分困难，一般为了解决这些问题，常采用乙醇和甲醛固定的方法来处理样品，再对样品dna 进行提取以及扩增。使用乙醇固定样品具有硬化，固定，脱水作用，对组织渗透迅速，特别适合组织中核酸的保存，相比于甲醛等其它固定方法，此法更简单，保存时间更长质量更好，也更加清洁无害。乙醇固定样品主要应用于水产种质资源鉴定，医院或兽医病理样品保存，法医样品保存等方面，在特定物种基因保护，生物多样性，动物分子标记，司法鉴定等方面有广泛的应用。
omega bio-tek 相应试剂盒既能够快速有效的抽提得到乙醇保存多年的样品基因组dna，又可以利用直接pcr 系统，快速的对乙醇保存样品进行pcr 鉴定，为您的研究提供最有力的工具。
实验材料
乙醇浸泡的鱼苗
实验步骤
1. e.z.n.a. tissue direct pcr kit
1) 分别取45ul at1 和5ul at2 到0.2ml pcr 管中，混合均匀。对于有较多样品需要操作的，可以先将at1 和at2 用量计算好，混合均匀后再分装到每一管中。
2) 取鱼苗一条，在at4 中浸泡约5-10min，滤纸吸干水份。
3) 将鱼苗浸没在上一步准备的at1 中56℃水浴或者pcr 仪上消化10-20min，中间可以涡旋混匀一次。
4) 消化完后的pcr 管置于90℃水浴或者pcr 仪上5min，稍微冷却后加入50ul at3 涡旋混匀。
5) 以上裂解液就可以作为pcr 的模板直接使用，pcr 体系中建议加入5ul 左右。
6) 取5ul e.z.n.a. tissue direct pcr kit 抽提得到的一条鱼苗的dna 作为模板，客户提供的引物y-30-r/f 作为引物，pcr 扩增。
7) pcr 扩增程序：
94℃ 2min；
94℃ 30s 52℃ 30s 72℃ 40s 33cycles；
72℃ 5min；
25℃ forever。
2. e.z.n.a.? microelute? genomic dna kit
1) 称量10mg 组织，加入200ul buffer tl；
2) 加20ul ob，55℃孵化至wan全降解；
3) 13,000xg 离心2min，转移上清至新管；
4) 加220ul buffer bl 涡旋混匀，70℃孵化10min；
5) 加220ul 无水乙醇，最大速度涡旋15s；
6) 将混合液过柱吸附，13,000xg 离心30-60s，弃滤液；
7) 加500ul buffer hb，离心；
8) 700ul dnawash buffer（加乙醇）；
9) 13,000xg 离心2min，干燥柱子；
10) 加25ul 70℃预热的elution buffer 洗脱。
中心血站污水处理设备处理工艺
了解橡塑保温管使用中的特点
TAYLOR测头（粗糙度仪）TYPE112-1504
中国出口至阿尔及利亚的货物需提供我国贸促会开具的“商事证明书”
水泥基渗透硅质聚苯保温板生产设备
乙醇固定样品DNA抽提和直接PCR实验
打造爆款技巧有哪些（不知道如何选品的跨境电商卖家看过来）
无心车床常见故障分析
南非空运胡德斯普雷特空軍基地介绍
地下室仓库除湿机怎样选
Rexroth DBDS30K1X/100溢流阀和减压阀区别
浅析化工工程废水处理设计思路
南京（NKG)空运曼谷（BKK）价格
跨境电商卖家出口到欧洲国家需要交纳多少VAT税？（内附欧洲各国VAT税率）
螺旋输送机采用优质无缝钢管\可实现物料的水平,倾斜输送
药品冷冻干燥机是利用了什么原理？
国际贸易英文怎么说（对外贸易英文全称）
双层耐温布风管
电动阀门控制器原理（图）
变色树脂的简述与有机物对树脂的污染
本实验从乙醇浸泡的鱼苗中提取dna，并利用直接pcr进行了鉴定。
实验原理
在实际的研究工作中，野外取样的地点一旦较为偏远，受条件的限制，很难保证得到的样品活体或能够快速冷冻；另外，对一些稀有物种和濒危种，鲜活样品的采集十分困难，一般为了解决这些问题，常采用乙醇和甲醛固定的方法来处理样品，再对样品dna 进行提取以及扩增。使用乙醇固定样品具有硬化，固定，脱水作用，对组织渗透迅速，特别适合组织中核酸的保存，相比于甲醛等其它固定方法，此法更简单，保存时间更长质量更好，也更加清洁无害。乙醇固定样品主要应用于水产种质资源鉴定，医院或兽医病理样品保存，法医样品保存等方面，在特定物种基因保护，生物多样性，动物分子标记，司法鉴定等方面有广泛的应用。
omega bio-tek 相应试剂盒既能够快速有效的抽提得到乙醇保存多年的样品基因组dna，又可以利用直接pcr 系统，快速的对乙醇保存样品进行pcr 鉴定，为您的研究提供最有力的工具。
实验材料
乙醇浸泡的鱼苗
实验步骤
1. e.z.n.a. tissue direct pcr kit
1) 分别取45ul at1 和5ul at2 到0.2ml pcr 管中，混合均匀。对于有较多样品需要操作的，可以先将at1 和at2 用量计算好，混合均匀后再分装到每一管中。
2) 取鱼苗一条，在at4 中浸泡约5-10min，滤纸吸干水份。
3) 将鱼苗浸没在上一步准备的at1 中56℃水浴或者pcr 仪上消化10-20min，中间可以涡旋混匀一次。
4) 消化完后的pcr 管置于90℃水浴或者pcr 仪上5min，稍微冷却后加入50ul at3 涡旋混匀。
5) 以上裂解液就可以作为pcr 的模板直接使用，pcr 体系中建议加入5ul 左右。
6) 取5ul e.z.n.a. tissue direct pcr kit 抽提得到的一条鱼苗的dna 作为模板，客户提供的引物y-30-r/f 作为引物，pcr 扩增。
7) pcr 扩增程序：
94℃ 2min；
94℃ 30s 52℃ 30s 72℃ 40s 33cycles；
72℃ 5min；
25℃ forever。
2. e.z.n.a.? microelute? genomic dna kit
1) 称量10mg 组织，加入200ul buffer tl；
2) 加20ul ob，55℃孵化至wan全降解；
3) 13,000xg 离心2min，转移上清至新管；
4) 加220ul buffer bl 涡旋混匀，70℃孵化10min；
5) 加220ul 无水乙醇，最大速度涡旋15s；
6) 将混合液过柱吸附，13,000xg 离心30-60s，弃滤液；
7) 加500ul buffer hb，离心；
8) 700ul dnawash buffer（加乙醇）；
9) 13,000xg 离心2min，干燥柱子；
10) 加25ul 70℃预热的elution buffer 洗脱。
中心血站污水处理设备处理工艺
了解橡塑保温管使用中的特点
TAYLOR测头（粗糙度仪）TYPE112-1504
中国出口至阿尔及利亚的货物需提供我国贸促会开具的“商事证明书”
水泥基渗透硅质聚苯保温板生产设备
乙醇固定样品DNA抽提和直接PCR实验
打造爆款技巧有哪些（不知道如何选品的跨境电商卖家看过来）
无心车床常见故障分析
南非空运胡德斯普雷特空軍基地介绍
地下室仓库除湿机怎样选
Rexroth DBDS30K1X/100溢流阀和减压阀区别
浅析化工工程废水处理设计思路
南京（NKG)空运曼谷（BKK）价格
跨境电商卖家出口到欧洲国家需要交纳多少VAT税？（内附欧洲各国VAT税率）
螺旋输送机采用优质无缝钢管\可实现物料的水平,倾斜输送
药品冷冻干燥机是利用了什么原理？
国际贸易英文怎么说（对外贸易英文全称）
双层耐温布风管
电动阀门控制器原理（图）
变色树脂的简述与有机物对树脂的污染