犬血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒操作要点及原理

犬血纤蛋白原降解产物(fdp)elisa试剂盒实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)。往预先包被犬血纤蛋白原降解产物(fdp)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物tmb显色,tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的犬血纤蛋白原降解产物(fdp)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(od 值),计算样品浓度。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
3. 样本孔中加入待测样本50μl;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体100μl,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μl),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μl,15min内,在450nm波长处测定各孔的od值。

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