通用微生物 rna 小量提取试剂盒
catalog no. tr430-50 (50 次反应)
tr430-50n (50 次反应 不含 dnase i )
highlights
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可从环境样品中(如粪便,土壤,水样,生物膜,拭子,唾液等)提取到无抑制物的 rna(含 microrna)。
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创新的裂解体系可有效的裂解格兰仕阳性/阴性菌,细菌,真菌,藻类,病毒。
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获得的 rna 产量高、纯度好,可以直接用于酶切、pcr、芯片,高通量测序等分子生物学实验。
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此产品仅供科研使用。
产品组成:
试剂盒组成
保存
50 次
裂解管
室温
50 个
核酸保护剂
室温
50 ml
rna 裂解液
室温
50 ml
rna 预洗液
室温
2x25 ml
rna 洗涤液
室温
24 ml
rnase-free h2o
室温
30 ml
抑制物去除剂
室温
30 ml
dnase i
室温
1 管
dna 消化液
室温
4 ml
3 号柱 g
室温
100 个
抑制物去除柱
室温
50 个
收集管(2ml)
室温
150 个
note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
特性:
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样品:可有效的从 200mg 以内的哺乳动物粪便,250mg 以内的土壤,200mg 以内的植物/种子,50-100mg 以
内的真菌细菌细胞,生物膜,水和拭子等样品中提取到总 rna.
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保存:核酸保护剂可有效的裂解细胞,灭活核酸酶和各种传染样品,并且对于在常温下运输和保存样品是一种
非常理想的试剂。
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rna 纯度: 获得的 rna 产量高、纯度好, 可以直接用 pcr,高通量测序等各种分子生物学实验。回收的
rna 里可能会有微量的 dna 残留,根据下游实验,如要*去除可用 dnase i 采用柱上消化方法。
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rna 大小: 回收到的 rna≥17 核苷酸。
? 所需设备:台式离心机,涡旋振荡器,细胞破碎仪(推荐)
试剂制备
rna 洗涤液 添加 96ml100%无水乙醇(或 104ml95%无水乙醇)到 24ml 的 rna 洗涤液 中并做好标记。
dnase i 添加275µl rnase-free h2o到冻干粉状的dnase i管中混匀,dnase i终浓度1u/µl,放在-20℃保存。
操作步骤:
rna提取步骤包含2个步骤(i)样品制备 (ii) rna纯化
样品制备:
以下离心步骤的离心力均在10,000-16,000 x g下进行,除非特殊说明。
1.
直接添加样品到裂解管中,然后添加 750µl 的核酸保护剂到裂解管中,拧紧盖子,在涡旋仪上振荡 5 分钟以内混
匀,。(如果使用高频振荡器时间可以适当缩短,如果使用低频振荡器时间可以适当延长到 20 分钟。)
样品类型
最大输入量
粪便
200 mg
土壤
250 mg
植物/种子
200 mg
液体样品和口腔拭子
250 μl
细胞(悬浮在保护剂中或者
pbs 等等渗
溶液中)
50-100 mg(湿重)
(109细菌,108酵母细胞,107哺乳动物细胞)
保护剂系列的收集套装
750μl
2.
将裂解管离心 1 分钟。
3.
将上述步骤中 400μl 上清加到一个干净的 rnase-free 离心管中。然后进行下面的 rna 纯化步骤。
rna纯化:
以下离心步骤的离心力均在10,000-16,000 x g下离心1分钟,除非特殊说明。
1.
添加2倍体积的rna裂解液(~800μl)到管子中混匀。
2.
添加等体积的 95-100%无水乙醇 (~1200μl)到上述溶液中混匀。
3.
将上述混合液添加 3 号柱 g 中,3 号柱 g 套在一个收集管内,离心,去除滤出液。(液体体积超过 800μl 需要反
复装填离心)
4.
添加 400μl rna 预洗液到柱子中,离心。去除滤出液。
5.
添加 400μl rna 洗涤液到柱子中,离心。将 3 号柱 g 套在一个干净的无 rnase 的离心管中。
6.
直接添加 85μl rnase-free h2o 到 3 号柱 g 基质上,离心。丢弃 3 号柱 g。
7.
添加 10μl dna 消化液和 5μl dnase i 溶液到离心管中,混匀。在室温(20-30℃)下孵育 15 分钟。
8.
添加2倍体积的rna裂解液(~200μl)到离心管中混匀。
9.
添加等体积的 95-100%无水乙醇 (~300μl)到上述溶液中中混匀。
10. 将上述混合液添加到一个新的 3 号柱 g 中,3 号柱 g 套在一个收集管内,离心,去除滤出液。
11. 添加 400μl rna 预洗液到柱子中,离心。去除滤出液。
12. 添加 700μl 的 rna 洗涤液到柱子里,离心。去除滤出液。
13. 添加 400μl 的 rna 洗涤液到柱子里离心 2 分钟以*去除乙醇,以免抑制下游反应。将 3 号柱 g 套在一个干净
的无 rnase 的离心管内。
14. 在吸附膜的中间部位加 100μl rnase-free h2o 离心。(如要提取到高浓度的 rna 可以添加 50μl)
15. 将抑制物去除柱套在一个新的收集管内,添加600μl的抑制物去除液,在≥8,000 x g下离心3分钟。
16. 把洗脱的rna(步骤14)放入制备好的抑制物去除柱内,将抑制物去除柱套在一个干净的无rnase的离心管内
并在16,000 x g下离心3分钟,得到的rna可进行后续试验或放在-80℃以下保存。
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