qPCR实验的Ct值有什么作用?

qpcr扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数(cycle threshold)。c代表cycle,t代表threshold。简单讲,ct值就是qpcr中起始模板扩增达到一定产物量时,所对应的循环数。那么你知道qpcr实验中的ct值有什么作用吗?让我们一起来看看吧!
一、指数扩增、模板量与ct值的关系
理想情况下,qpcr中的基因经过一定的循环数被指数扩增而积累,扩增循环数和产物量之间的关系是:扩增产物量=起始模板量×(1+en)循环个数。然而qpcr反应并不是一直处于理想情况下,当扩增产物量达到“一定产物量”时,此时循环个数为ct值,处于指数扩增时期。ct值与起始模板量的关系:模板的ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。起始模板量浓度越高,ct值越小;起始模板量浓度越低,ct值越大。
二、扩增曲线、荧光阈值与一定产物量
qpcr扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现,也就是扩增曲线。在pcr早期,扩增处于理想情况下,循环数较少,产物积累少,产生荧光的水平不能与荧光本底背景明显地区别,之后荧光的产生增加进入指数期。可以在pcr反应刚处于指数期的某一点上来检测pcr产物的量,以此作为“一定产物量”,并且由此来推断模板最初的含量。因此,一定产物量对应的荧光信号强度,也就是荧光阈值。
在pcr的后期,扩增曲线不再呈现指数扩增,进入线性期和平台期。
三、ct值的重现性
pcr循环在到达ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期,此时微小误差尚未放大,因此ct值的重现性极hao,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的ct值是恒定的。
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