ReadyPCRTM快速16S rDNA细菌鉴定试剂盒介绍及参数分析
nu-16s01
试剂盒应用
本试剂盒主要用于细菌16s rdna 的快速检测，无需经过繁琐的基因组dna 提取纯化，取样后直接
pcr 扩增即可获得16s rdna 信息，通过比对16s 片段序列，最终获得细菌种属信息。
本试剂盒可以检测量低至104 个/ml 个细菌，对难培养、珍贵样本、表型不能鉴定的未知细菌快速扩
增尤为方便。使用本试剂盒前无需提取纯化，可直接对菌斑、甘油菌或对数生长期菌进行检测，从
而大大缩短了检测时间。试剂盒中提供的16s pcr premix 已包含有染料，pcr 结束后直接进行琼脂
糖凝胶电泳，pcr 产物可直接进行测序分析。
本产品仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
保存条件
-20ºc 保存。使用时请置于冰上。
使用方法
1、样本准备：
1）菌液：取对数生长期菌液1-3 μl 加入pcr 反应体系中。
2）甘油菌：取1μl 菌液加入pcr 反应体系中。
3）单菌落：无菌吸头或者无菌牙签挑取单个菌落置于500 μl 无菌生理盐水中，涡旋混合均匀，取
1-3 μl 加入pcr 反应体系中。
2、推荐pcr 反应体系
3、按照以下方法设定pcr 反应
4、琼脂糖凝胶电泳
使用1%琼脂糖凝胶进行电泳，不同菌株电泳片段稍微差别，一般为1.5kb 左右。
5、pcr 产物回收和测序
使用切胶回收试剂盒进行回收，并使用以下推荐引物进行测序。将dna 测序结果与ncbi 数据
库进行比对，确定细菌种类。
注意事项
1、超净台中操作，应佩戴无菌手套，穿实验服，操作前用75%乙醇对实验器具进行消毒。
2、使用无菌移液吸头和离心管，开盖务必轻柔，减少气溶胶污染。
3、尽可能使用2 次纯化细菌，以提高测序有效率。
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3）单菌落：无菌吸头或者无菌牙签挑取单个菌落置于500 μl 无菌生理盐水中，涡旋混合均匀，取
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3、尽可能使用2 次纯化细菌，以提高测序有效率。
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