感受态细胞实验使用方法
感受态细胞菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80laczδm15基因的产物可与puc载体编码的b-半乳糖苷酶氨基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。reca1和enda1 的突变有利于克隆dna 的稳定和高纯度质粒dna的提取。
感受态细胞操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1 、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。
一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用dna 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的dna（100 μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒dna 所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30 分钟。
3、 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 分钟，该过程不要摇动离心管。
4、 向每个离心管中加入900 μl 无菌的soc 或lb 培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时（160-220 转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、 将离心管内容物混匀，吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的sob 或lb 固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16 小时。
涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的dna 总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的dna 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。
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4、 向每个离心管中加入900 μl 无菌的soc 或lb 培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时（160-220 转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、 将离心管内容物混匀，吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的sob 或lb 固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16 小时。
涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的dna 总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的dna 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。
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