DNA提取方法的总结！
dna提取方法的一些总结：细菌dna的提取：
（一）
试剂：
1. 抽提缓冲液
2% ctab (w/v)
2% pvp k25 (w/v) （去色素）
100mm tris-hcl (ph8.0)
25mm edta (ph8.0)
2.0m nacl
2.10m licl
3. 2m licl
4.depc-water（抑制rna酶活性）
5. 3m naac (ph5.2)
6. 96% 乙醇
7. 70% 乙醇
步骤：
1.抽提缓冲液65℃预热；
2. 加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min；
3. 加酚/lv仿/异戊醇（25：24：1），振荡，离心12,000rpm，10min；
4.取上清，加lv/异戊醇（24：1）振荡，离心12,000rpm，10min；
5. 取上清，重复4步骤；
6. 加入1/10体积的3m醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20c沉淀；
11. 离心12,000rpm，10min；
12. 弃上清，70％乙醇洗，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
(二)（我们常用的方法，但是有时有些细菌特别不好提，就用上面的方法）
1. 将菌株接种于液体lb培养基，37℃震荡培养过夜。
2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3. 沉淀物加入567 ul的te缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul 10%sds和15ul的蛋白酶k，混匀，于37℃温育1h.
4. 加入100ul 5mol/l nacl, 充分混匀，再加入80ul ctab/nacl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5. 加入等体积的酚/lv/异戊醇混匀，离心4-5min, 将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到dna沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．
真菌dna的提取：
（一）
1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入4ml提取液，快速振荡混匀
3.加入等体积的4ml的lv:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本的哟！）
4.1000rpm，4℃，5min
5.上清用体积的lv:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
6.取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 ulte中
8.加入1 ul rnasea （10 mg/ml），37℃处理1 hr
9.用酚（ph8.0）:lv仿:异戊醇(25:24:1)和lv仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
10.取上清，1/10v 3m naac,2.5v体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
11.沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ulte中，-20 ℃保存备用
dna提取液：0.2m tris-hcl（ph 7.5），0.5m nacl，0.01m edta，1％sds，
3m naac
（二）
1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3 ml 65℃预热的dna提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次
3．加入1 ml 5m kac，冰浴20 min
4．等体积的lv仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
5．取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 min
6．用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 l te中
7．加入1 ul rnasea （10 mg/ml），37℃处理1 hr
8．用酚（ph8.0）:lv仿:异戊醇(25:24:1)和lv仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
9．取上清，1/10v 3m naac,2.5v体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
10．沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ul te中，-20 ℃保存备用。
注：仅供参考！
BQ45F/PPL保温三通球阀技术操作
营养速溶燕麦片加工生产线设备的工艺流程以及技术特点介绍
汽车检具和三坐标检测的对比优势有哪些？
LED路灯LED灯的发光效率对比分析
小鼠催产素(OT）(OPG）ELISA试剂盒课题专用
DNA提取方法的总结！
乡镇养殖屠宰场生活废水气浮机设备原理
ELGO位置指示器
润滑油检测指标粘度的含义
如何看待德国P+F倍加福超声波传感器碰到杂质或分界面会产生显著反射
消防栓远程监控系统概述
盐雾腐蚀试验机中间歇性喷雾试验方法
高海拔宇宙线观测站(LHAASO)科学观测启动
烟草废水处理的工艺流程说明
双重夹缝中的噪声治理，在2019年迎来“关键一击”
混凝土泵易损件有哪些
童床铺与侧面冲击测试仪_TST仪器
怎么看液氮罐型号上的字母？
机双水的纯水机的工作流程示意您知道吗？
LED工作灯车间照明灯使用范围用途
（一）
试剂：
1. 抽提缓冲液
2% ctab (w/v)
2% pvp k25 (w/v) （去色素）
100mm tris-hcl (ph8.0)
25mm edta (ph8.0)
2.0m nacl
2.10m licl
3. 2m licl
4.depc-water（抑制rna酶活性）
5. 3m naac (ph5.2)
6. 96% 乙醇
7. 70% 乙醇
步骤：
1.抽提缓冲液65℃预热；
2. 加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min；
3. 加酚/lv仿/异戊醇（25：24：1），振荡，离心12,000rpm，10min；
4.取上清，加lv/异戊醇（24：1）振荡，离心12,000rpm，10min；
5. 取上清，重复4步骤；
6. 加入1/10体积的3m醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20c沉淀；
11. 离心12,000rpm，10min；
12. 弃上清，70％乙醇洗，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
(二)（我们常用的方法，但是有时有些细菌特别不好提，就用上面的方法）
1. 将菌株接种于液体lb培养基，37℃震荡培养过夜。
2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3. 沉淀物加入567 ul的te缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul 10%sds和15ul的蛋白酶k，混匀，于37℃温育1h.
4. 加入100ul 5mol/l nacl, 充分混匀，再加入80ul ctab/nacl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5. 加入等体积的酚/lv/异戊醇混匀，离心4-5min, 将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到dna沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．
真菌dna的提取：
（一）
1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入4ml提取液，快速振荡混匀
3.加入等体积的4ml的lv:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本的哟！）
4.1000rpm，4℃，5min
5.上清用体积的lv:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
6.取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 ulte中
8.加入1 ul rnasea （10 mg/ml），37℃处理1 hr
9.用酚（ph8.0）:lv仿:异戊醇(25:24:1)和lv仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
10.取上清，1/10v 3m naac,2.5v体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
11.沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ulte中，-20 ℃保存备用
dna提取液：0.2m tris-hcl（ph 7.5），0.5m nacl，0.01m edta，1％sds，
3m naac
（二）
1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3 ml 65℃预热的dna提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次
3．加入1 ml 5m kac，冰浴20 min
4．等体积的lv仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
5．取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 min
6．用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 l te中
7．加入1 ul rnasea （10 mg/ml），37℃处理1 hr
8．用酚（ph8.0）:lv仿:异戊醇(25:24:1)和lv仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
9．取上清，1/10v 3m naac,2.5v体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
10．沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ul te中，-20 ℃保存备用。
注：仅供参考！
BQ45F/PPL保温三通球阀技术操作
营养速溶燕麦片加工生产线设备的工艺流程以及技术特点介绍
汽车检具和三坐标检测的对比优势有哪些？
LED路灯LED灯的发光效率对比分析
小鼠催产素(OT）(OPG）ELISA试剂盒课题专用
DNA提取方法的总结！
乡镇养殖屠宰场生活废水气浮机设备原理
ELGO位置指示器
润滑油检测指标粘度的含义
如何看待德国P+F倍加福超声波传感器碰到杂质或分界面会产生显著反射
消防栓远程监控系统概述
盐雾腐蚀试验机中间歇性喷雾试验方法
高海拔宇宙线观测站(LHAASO)科学观测启动
烟草废水处理的工艺流程说明
双重夹缝中的噪声治理，在2019年迎来“关键一击”
混凝土泵易损件有哪些
童床铺与侧面冲击测试仪_TST仪器
怎么看液氮罐型号上的字母？
机双水的纯水机的工作流程示意您知道吗？
LED工作灯车间照明灯使用范围用途