Phusion® 高保真 DNA 聚合酶说明书
phusion® 高保真 dna 聚合酶用于高速、高性能 pcr。thermo scientific® phusion 高保真 dna 聚合酶由 new england biolabs 制造并进行质量控制，具有高保真度和强大的性能。保真度比 taq 高 50 倍稳健的反应 - 以最少的优化获得最大成功提供多种缓冲液，可针对不同 dna 模板定制反应设置高保真 dna 聚合酶对于扩增后 dna 序列需要正确的应用非常重要。其结构是一种与持续增强结构域融合的新型火球菌样酶，可提高保真度和速度。phusion dna 聚合酶是克隆的理想选择，可用于长或困难的扩增子。phusion 的错误率比 taq dna 聚合酶低 50 倍以上，比激烈火球菌 dna 聚合酶低 6 倍 (1)，是目前最准确的热稳定聚合酶之一。phusion dna 聚合酶具有 5´→ 3´ 聚合酶活性、3´→ 5´ 核酸外切酶活性，可产生平端产物。phusion dna 聚合酶配有标准 5x phusion hf 缓冲液以及 5x phusion gc 缓冲液，可用于复杂或富含 gc 的模板。这些缓冲液均含有 mgcl2（最终 [1x] 反应浓度为 1.5 mm）。还可以使用提供的 dmso 或 mgcl2 溶液来优化反应。
使用经 frey & suppman, 1995 修改的基于 laci 的方法进行保真度测定。
使用不同的聚合酶从 50 ng jurkat gdna 中扩增出 3.8 kb 片段。反应按照制造商推荐的条件进行。指示延长时间（以分钟为单位）。梯子 l 是 1 kb dna 梯子 (neb# n3232)。
单位定义one unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dntp into acid insoluble material in 30 minutes at 74°c.
贮存溶液20 mm tris-hcl100 mm kcl1 mm dtt0.1 mm edta200 µg/ml bsa50% glycerol1x stabilizersph 7.4 @ 25°c
热失活否
5' - 3' 核酸外切酶no
3' - 5' 核酸外切酶yes
单位活性检测条件25 mm taps-hcl (ph 9.3 @ 25°c), 50 mm kcl, 2 mm mgcl2, 1 mm b-mercaptoethanol, 200 µm dntps including [3h]-dttp and 15 nm primed m13 dna.
特点稳健的反应 – 以最少的优化获得最大的成功高的保真度 – 比 taq 高 50 倍。高速 – 显着缩短延伸时间（比 pfu 快 10 倍）高产量 – 使用最少量的酶提高产物产量 多功能– 可用于常规 pcr 以及长或困难的模板应用特性pcr克隆长或困难的扩增高通量聚合酶链式反应
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