细胞培养基是一种必bu可少的液体培养基,用于支持和扩展细胞在体外的生长。合成培养基种类很多,常用的有十多种,目前使用zui广泛的是rpmi 1640.mem,dmem和dmem/f12.
rpmi 1640 培养基:最初为培养小鼠白血病细胞的需要而制备。开始的配方适合悬浮细胞的生长,主要针对淋巴细胞,后经几次改良从rpmi 1630.1634而至1640.其成分较为简单。现发现它适应于多种类型细胞的生长,包括肿瘤细胞以及很多正常组织细胞体外培养。
mem 培养基:是zui低必需培养基,主要是贴壁细胞的培养,修改配方后也可用于其他类型细胞培养,例如如无钙(ca)mem培养基可被用于悬浮细胞的培养,而hank’s平衡盐的mem培养基可被用于二倍体细胞的培养。
dmem 培养基:dmem细胞培养基是在mem培养基的基础上研制的。与mem比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(4500mg/l)和低糖型(1000mg/l)。而mem中葡萄糖含量1000mg/l。低糖的酵母适合在7%以下的糖浓度中生存,而高糖的酵母适合在7%以上糖浓度中生存。dmem-高糖型适合生长较快、附着性较差的肿瘤细胞,克隆细胞,也可用于dna转染的转化细胞的培养;高糖型使细胞生长过快,不利于融合细胞的染色体稳定,做单抗细胞融合时,一般使用低糖型,dmem-低糖型主要用于干细胞的培养。
dmem/f12(1:1) 培养基:dmem培养基营养成分浓度较高,f12培养液成分复杂,含有多种微量元素。dmem和f12以1:1结合,称为dmem/f12培养基,该培养基适用于血清含量较低条件下细胞培养,常用于细胞的克隆生长及干细胞培养。
neurobasal:这是一种专为神经细胞设计的培养基,适用于神经元和神经胶质细胞的培养。
培养基的颜色主要是酚红来显示的,酚红指示颜色非常灵敏,p值范围为6-8.颜色由黄变为紫红。酚红不是必须的,在有些情况下甚至是多余的,酚红有类似固醇类激素的作用,如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养,zui,好不要添加。但是为了培养方便,能让我们直观地感觉培养液的状况,加入酚红后,如果培养液偏酸了,就显示偏黄色,偏碱性了就显示偏紫色。另外在做流式细胞的时候,酚红会对结果产生影响,因此也不要添加。
在细胞培养过程中,检查培养液颜色和透明度变化,颜色变黄,说明ph下降;变红或紫红色,说明ph上升,细胞生长停滞、死亡,一般生长稳定的细胞2-3天换液一次,生长缓慢的细胞可3-4天换液一次。一旦新鲜的培养基中添加了血清和抗生素,建议1周内使用完。只有充分了解培养基,才能养好细胞!
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