关于WB实验中的NC膜你知道多少？
首先了解下，体外诊断原料的nc和蛋白转移的nc是有区别的：体外诊断原料的nc膜是作为核心载体原料，孔径在10-15μm，带背衬。而蛋白转移的nc膜，一般用于wb实验，孔径0.22um和0.45um，不带背衬。
其次用在免疫印迹中最常规的膜的类型是硝酸纤维素膜（nc 膜）和聚偏氟乙烯（pvdf）膜。两者主要区别：
产品 biotrace nt 膜 fluorotrans w pvdf 膜
推荐货号 66485 bsp0161
描述 纯硝酸纤维素，0.22μm 聚偏氟乙烯，0.2μm
应用 蛋白转移核酸检测elisa 蛋白转移蛋白点或条印迹免疫染色检测
优势 高灵敏度低背景 最高的灵敏度低背景低 burn through高结合力化学品抗性高拉伸强度
结合反应 疏水和静电 疏水（甲醇浸泡）
固定方法 western 转移点或条印迹烤和紫外交联（用于核酸） western 转移点或条印迹
转印膜的免疫印迹常见问题分析与解决方案
问题 可能原因 解决方案
没有阳性条带或很弱 抗体活性低或效价低 分装和在零下 20 度储存抗体溶液以及避免多次反复冻融。使用更高浓度的一抗。
转膜不充分（转膜后通过凝胶染色得到了确认） 增加转膜的时间。降低转膜缓冲液中甲醇的浓度。加入 0.1%的 sds 能够帮助大蛋白的转膜。
低的偶联活性 确保胶和膜之间没有气泡。使用不含 sds 的转膜缓冲液。如果使用的是 biotrace nt 膜，则需在转膜缓冲液中加入甲醇
封闭剂干扰了抗体的结合 在 4 度储存偶联物。增加偶联物的浓度或孵育时间。
背景高 使用一个不同的封闭剂。
抗体和酶偶联的效果差 颜色反应时间太长 当需要的颜色深度达到之后立即停止反应
封闭不全 使用亲和纯化的二抗。
封闭剂中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性 增加封闭时间。使用一个不同的封闭剂。
背景点状物 缓冲液中存在颗粒 试剂使用前用过滤器过滤。
假阳性或点状 一抗的交叉反应 进一步纯化或预吸附膜抗体。如果条件可以的话使用单抗。降低一抗的浓度。
样本中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性（通过在检测中不加一抗和二抗得到确认） 在封闭前通过 80 度 20 分钟加热来失活酶的活性。
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背景高 使用一个不同的封闭剂。
抗体和酶偶联的效果差 颜色反应时间太长 当需要的颜色深度达到之后立即停止反应
封闭不全 使用亲和纯化的二抗。
封闭剂中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性 增加封闭时间。使用一个不同的封闭剂。
背景点状物 缓冲液中存在颗粒 试剂使用前用过滤器过滤。
假阳性或点状 一抗的交叉反应 进一步纯化或预吸附膜抗体。如果条件可以的话使用单抗。降低一抗的浓度。
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