梭菌显色培养基(膜过滤法)

梭菌显色培养基(膜过滤法)
m-cp agar base
货号
产品
规格
价格
m1354
梭菌显色培养基
m-cp agar base
100g(1.4l)
500g(7.0l)
询价
fd153
添加剂1
m-cp selective supplement i
5管(2.5l)
询价
fd154
添加剂2
m-cp selective supplement ii
5管(2.5l)
询价
fd154a
改良的添加剂2
m-cp selective supplement ii, modified
5管(2.5l)
询价
应用
用于欧盟指导委员会*的对水样中产气荚膜梭菌的分离和计数(采用膜过滤法)(3)
背景
产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性芽孢杆菌,是人畜共患病原菌,也是人畜肠道正常菌群,它广泛存在于自然环境如土壤、粪便和污水中(1)。产气荚膜梭菌分为五个亚型,其中一些亚型能分泌外毒素。产气荚膜梭菌作为条件致病菌,可导致水和食品污染,引发畜禽和人类疾病,如坏死性肠炎、腹泻、肠毒血症、气性坏疽和食物中毒
有报道指出,大肠菌群作为水质微生物学指标是不可靠的,而产气荚膜梭菌可作为一个水污染的指示菌。欧洲已将其作为水质卫生标准的补充条款,who已在水质检测中将其作为水质污染的微生物。产气荚膜梭菌数量与水污染程度有一定的相关关系。我国《食品安全标准 饮用天然矿泉水检验方法》gb8538—2016规定,天然矿泉水产品和水源水需检测产气荚膜梭菌。
目前,检测产气荚膜梭菌多采用培养基法和pcr法。实践证明,采用快速膜过滤技术和显色培养基(mcp培养基),简单、易行、可靠。
原理
m-cp平板是根据armon和payment的配方而成(2)。培养基中的胰蛋白䏡、酵母粉提供氮源营养,蔗糖提供碳源营养。溴甲酚紫为ph指示剂。吲哚β-d-葡萄糖苷为β-d-葡糖苷酶或纤维二糖酶的显色底物,二磷酸*用于检测酸性磷酸化酶。添加的d-环*和*(fd153)抑制伴随的其他菌群。厌氧环境也提供了进一步的选择性。当黄色(纤维二糖酶阴性)菌落在暴露于氨烟30秒后变为玫瑰红时,即可认为是产气荚膜梭菌。颜色鉴别有时是困难的,因此,可挑取典型菌落(黄变粉色)和非典型菌落(绿色或没变色)进行验证。验证试验可通过硫还原、革兰氏阳性、芽孢杆状、无动力性、硝还原、明胶液化、乳糖发酵和其他生化试验证实(4)。
培养基组分
成分
g/l
胰蛋白䏡
30.000
酵母粉
20.000
蔗糖
5.000
l-盐酸半*
1.000
7水*
0.100
溴甲酚紫
0.040
6水氯化铁
0.090
吲哚β-d-葡萄糖苷
0.060
琼脂
15.000
终ph值为7.6±0.2(25℃)
配制
35.6g干粉溶485ml蒸馏水。加热煮沸使培养基全溶。15磅121℃高压灭菌15分钟。冷却至45-50℃。用5ml无菌蒸馏水溶解添加剂1(货号:fd153),用10ml无菌蒸馏水溶解改良的添加剂2(货号:fd154a),将添加剂2(货号:fd154)室温孵育。在485ml无菌溶解冷却的梭菌显色培养基溶液中,无菌加入1管添加剂1(货号:fd153),1管添加剂2(货号:fd154)或改良的添加剂2(货号:fd154a),混匀,倒入无菌平皿。
质量控制
外观:淡黄至淡绿色松散粉末。
成胶性:牢固,与1.5%琼脂凝胶相当。
成品颜色和透明度:紫色透明至轻微不透明凝胶。
ph值:7.40-7.80
培养反应:在无氧条件下加入添加剂后,43-45℃孵育18-24小时,观察接种反应。
有机体
接种(cfu)
生长
回收率
前一个批次的回收率
磷酸化酶试验
产气荚膜梭菌atcc 12924
50-100
好-旺盛
≥50%
≥70%
阳性,黄色菌落*
产气荚膜梭菌atcc13124
50-100
好-旺盛
≥50%
≥70%
阳性,黄色菌落*
产气荚膜梭菌atcc 10543
50-100
好-旺盛
≥50%
≥70%
阳性,黄色菌落*
产气荚膜梭菌atcc 12916
50-100
好-旺盛
≥50%
≥70%
阴性,蓝色菌落
双酶梭状芽胞杆菌nctc 506
50-100
好-旺盛
≥50%
≥70%
阴性,蓝色菌落
伤*atcc
6539
≥103
抑制
0%
0%
0%
*atcc 25923
≥103
抑制
0%
0%
0%
大肠杆菌atcc
25922
≥103
抑制
0%
0%
0%
大肠杆菌atcc
8739
≥103
抑制
0%
0%
0%
暴露于氨烟30秒后菌落变为暗玫瑰色至淡粉红色。
储存
2--8℃
参考文献
1. czeczulin j. r., hanna p. c., mcclane b. a., 1993, infect. immun., 61: 3429-3439.
2. armon r. and payment p., 1988, can. j. microbiol., 34:78-79.
3. directive of the council of the european union 98/83/ec
4. sartory d. p., field m., curbishley s. m., pritchard a. m., 1998, lett. appl. microbiol., 27:323-327.
产品引用文献
1. kadam, a.m., et al., pathogen removal from municipal wastewater in constructed soil filter.ecological engineering, 2008. 33(1): p. 37‐44.
2. raed s. al‐wasify, a.‐s.a. al‐sayed, and m.m. kamel, sensitivity and specificity of chromogenic media for detection of some pathogens in water. international journal of environment and sustainability, 2013. 2(1): p. 1‐9.

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