牛羊口蹄疫亚Ⅰ型病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
牛羊口蹄疫亚ⅰ型病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
使用说明书
【产品名称】
通用名：牛羊口蹄疫亚ⅰ型病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：test kit for antibodies to bovine and sheep foot and mouth disease virus asia ⅰ （elisa）
【包装规格】 96t×1/盒、96t×2/盒、96t×5/盒
【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，fmdv）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛羊血清中口蹄疫病毒亚ⅰ抗体，可用于口蹄疫病毒亚ⅰ疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒由预包被口蹄疫病毒亚ⅰ型抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（elisa）原理检测牛羊血清样本中口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体。实验时在酶标板中加入待检样本和抗体工作液，经温育后洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加tmb底物液，若样品中含有口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体。
【试剂盒组成】
序号
名称
规格/96t×1
规格/96t×2
规格/96t×5
1
酶标记物
11ml×1(红盖)
11ml×2(红盖)
26ml×2(红盖)
2
抗体工作液
6ml×1(蓝盖)
11ml×1(蓝盖)
26ml×1(蓝盖)
3
20x浓缩洗涤液
40ml×1(白盖)
40ml×1(白盖)
200ml×1(白盖)
4
底物液a
6ml×1(白盖)
11ml×1(白盖)
26ml×1(白盖)
5
底物液b
6ml×1(黑盖)
11ml×1(棕盖)
26ml×1(黑盖)
6
终止液
6ml×1(黄盖)
11ml×1(黄盖)
26ml×1(黄盖)
7
阳性对照
1.0 ml×1(红盖)
1.5 ml×1(红盖)
2.0 ml×1(红盖)
8
阴性对照
1.0 ml×1(绿盖)
1.5 ml×1(绿盖)
2.0 ml×1(绿盖)
9
酶标板
96t×1
96t×2
96t×5
10
盖板膜
1
2
5
11
自封袋
1
1
2
12
说明书
1
1
1
【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.待检血清样本恢复室温、混匀待用。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔先加入45μl工作洗涤液,再加入5μl血清样本。
4.每孔加抗体工作液50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液a、底物液b各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（a值）
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥0.8，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。
【检验结果的解释】
1. pi（阻断率）=（1- 阴性对照平均a值(样本a值)）×100%，pi≥50%为阳性；pi＜50%为阴性。
2.本实验结果为阴性时表明抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测牛羊血清中口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体，根据pi值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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【产品名称】
通用名：牛羊口蹄疫亚ⅰ型病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
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【包装规格】 96t×1/盒、96t×2/盒、96t×5/盒
【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，fmdv）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛羊血清中口蹄疫病毒亚ⅰ抗体，可用于口蹄疫病毒亚ⅰ疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒由预包被口蹄疫病毒亚ⅰ型抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（elisa）原理检测牛羊血清样本中口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体。实验时在酶标板中加入待检样本和抗体工作液，经温育后洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加tmb底物液，若样品中含有口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫病毒亚ⅰ型抗体。
【试剂盒组成】
序号
名称
规格/96t×1
规格/96t×2
规格/96t×5
1
酶标记物
11ml×1(红盖)
11ml×2(红盖)
26ml×2(红盖)
2
抗体工作液
6ml×1(蓝盖)
11ml×1(蓝盖)
26ml×1(蓝盖)
3
20x浓缩洗涤液
40ml×1(白盖)
40ml×1(白盖)
200ml×1(白盖)
4
底物液a
6ml×1(白盖)
11ml×1(白盖)
26ml×1(白盖)
5
底物液b
6ml×1(黑盖)
11ml×1(棕盖)
26ml×1(黑盖)
6
终止液
6ml×1(黄盖)
11ml×1(黄盖)
26ml×1(黄盖)
7
阳性对照
1.0 ml×1(红盖)
1.5 ml×1(红盖)
2.0 ml×1(红盖)
8
阴性对照
1.0 ml×1(绿盖)
1.5 ml×1(绿盖)
2.0 ml×1(绿盖)
9
酶标板
96t×1
96t×2
96t×5
10
盖板膜
1
2
5
11
自封袋
1
1
2
12
说明书
1
1
1
【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.待检血清样本恢复室温、混匀待用。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
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1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔先加入45μl工作洗涤液,再加入5μl血清样本。
4.每孔加抗体工作液50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
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7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液a、底物液b各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟。
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2.本实验结果为阴性时表明抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
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【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
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