1、 加被检抗原(重组蛋白或自然样品):用稀释液(ds01、as01、as02、as03、as04)将被检抗原按实验设计稀释,每孔100µl,同时用稀释液作空白对照。封板膜封板,室温放置两小时。
2、 洗涤:到尽板孔中的液体,加满洗涤液(ws03),静止放十秒,洗四次,后在毛巾或吸水纸上拍干板子:
3、 加检测抗体:将生物素标记的检测抗体稀释适当浓度(稀释液ds01),每孔100 µl封板膜封板,室温放置一小时:
4、 洗涤:到尽板孔中的液体,加满洗涤液(ws03),静止放十秒,洗四次,后在毛巾或吸水纸上拍干板子:
5、 加亲和素-辣根过氧化酶(hrp)稀释适当浓度(稀释液hd01)每孔100µl,封板膜封板,室温放置30分钟:
6、 加底物:新鲜配制的四甲基联苯胺溶液(tmb),每孔100µl,室温暗处放置30分钟:
7、 加终止液(ss01):每孔100µl,立即读值:
8、 观察结果:用酶标仪记录450nm读数.
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