选对，用对，ELISA试剂盒才能事半功倍！
elisa试剂盒的正确选购与运用尤为重要。尤为是关于新手而言，掌握elisa试剂盒的选购与运用方面的知识更为重要。
一、elisa试剂盒选购技巧
试剂盒的应用种属、检测样本的品种：除试剂盒特别阐明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本品种有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用；
试剂盒的检测规模：也便是标曲规模，要留意待测样本浓度是否落在标曲规模内，关于浓度很高的样本，能够*行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。
二：elisa试剂盒中的稀释线性及回收率：
a、稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性；参阅样本稀释线性能够挑选样本的较佳稀释倍数；
b、稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将规范品参加样本中测定参加的规范品浓度测定是否准确；同样也是确定待测样本稀释倍数的参阅目标。一般线性和回收率的规模在80%-120%比较适宜；
三：elisa试剂盒的其它目标：
a、灵敏度：试剂盒能够检测到的样本低浓度的才能，假如待检目标含量很低，需求挑选高灵敏度的elisa试剂盒；
b、板间和板内的变异系数（cv%）:反映板内和不同板之间是否均匀，cv%一般小于10% 比较好。
c、试剂盒的有效期：试剂盒的有效期一般是半年至一年，样本预备时刻需求考虑到试剂盒的有效期。
四、elisa试剂盒运用技巧
样本的预备：尽量运用新鲜样本，不运用有溶血，被细菌污染、标本保存时刻过长和标本凝固不全的样本。elisa检测宜收集新鲜标本，如不能当即测定，5天之内应4℃保存，关于1周后检测的样本应低温冻存；做好分装，*冻存的样本避免重复冻融。
仔细阅读阐明书，了解整个流程，引荐画出扼要步骤图；提前预备试剂，比方常见20x洗涤液是浓缩液，需求用超纯水提前稀释预备好。一般的检测抗体和酶标二抗需求用对应的稀释液稀释至工作浓度。不同批次的试剂不要混用，查看各组分的有效期。
预包被的酶标板条和各试剂组份需求室温平衡30 min以上，这样做的意图能使反响微孔内的温度较快地达到所需温度，预防后续实验中因为孵育温度或是时刻不够充沛，而将一些弱阳性样本不能检出。
待测样本加样：待检样本过多时，建议分批操作；需求稀释的样本提前做好稀释，留意选对适宜稀释液；控制好加样时刻，避免加样费时过长造成差错；留意加样视点，笔直参加孔底，不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头，避免交叉污染。
五：elisa试剂盒温育和洗板
温育时刻和温度一般依据试剂盒的阐明书进行挑选。温育时能够选用水浴或许湿盒孵育,避免“边缘效应”。
①手工洗板时，决定时要笔直，避免交叉污染，用力不能过猛，避免抗原抗体复合物脱离；
②洗板机洗板时应常常查看冲洗头是否通畅。
显色：市售elisa试剂盒中，一般是以四甲基联苯胺(tmb)为底物的显色液，反响条件为37℃或室温反响15～30 min。显色反响需求避光。
读数和数据剖析：终止后读取结果尽量在15min内完成，读取od值时酶标仪需先预热15～30 min再进行。数据剖析一般用四参数和直线拟合法，挑选哪种拟合方式，能够依据标曲的相关系数（r2）来确定，r2一般需求大于0.99。
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试剂盒的检测规模：也便是标曲规模，要留意待测样本浓度是否落在标曲规模内，关于浓度很高的样本，能够*行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。
二：elisa试剂盒中的稀释线性及回收率：
a、稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性；参阅样本稀释线性能够挑选样本的较佳稀释倍数；
b、稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将规范品参加样本中测定参加的规范品浓度测定是否准确；同样也是确定待测样本稀释倍数的参阅目标。一般线性和回收率的规模在80%-120%比较适宜；
三：elisa试剂盒的其它目标：
a、灵敏度：试剂盒能够检测到的样本低浓度的才能，假如待检目标含量很低，需求挑选高灵敏度的elisa试剂盒；
b、板间和板内的变异系数（cv%）:反映板内和不同板之间是否均匀，cv%一般小于10% 比较好。
c、试剂盒的有效期：试剂盒的有效期一般是半年至一年，样本预备时刻需求考虑到试剂盒的有效期。
四、elisa试剂盒运用技巧
样本的预备：尽量运用新鲜样本，不运用有溶血，被细菌污染、标本保存时刻过长和标本凝固不全的样本。elisa检测宜收集新鲜标本，如不能当即测定，5天之内应4℃保存，关于1周后检测的样本应低温冻存；做好分装，*冻存的样本避免重复冻融。
仔细阅读阐明书，了解整个流程，引荐画出扼要步骤图；提前预备试剂，比方常见20x洗涤液是浓缩液，需求用超纯水提前稀释预备好。一般的检测抗体和酶标二抗需求用对应的稀释液稀释至工作浓度。不同批次的试剂不要混用，查看各组分的有效期。
预包被的酶标板条和各试剂组份需求室温平衡30 min以上，这样做的意图能使反响微孔内的温度较快地达到所需温度，预防后续实验中因为孵育温度或是时刻不够充沛，而将一些弱阳性样本不能检出。
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五：elisa试剂盒温育和洗板
温育时刻和温度一般依据试剂盒的阐明书进行挑选。温育时能够选用水浴或许湿盒孵育,避免“边缘效应”。
①手工洗板时，决定时要笔直，避免交叉污染，用力不能过猛，避免抗原抗体复合物脱离；
②洗板机洗板时应常常查看冲洗头是否通畅。
显色：市售elisa试剂盒中，一般是以四甲基联苯胺(tmb)为底物的显色液，反响条件为37℃或室温反响15～30 min。显色反响需求避光。
读数和数据剖析：终止后读取结果尽量在15min内完成，读取od值时酶标仪需先预热15～30 min再进行。数据剖析一般用四参数和直线拟合法，挑选哪种拟合方式，能够依据标曲的相关系数（r2）来确定，r2一般需求大于0.99。
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