埃博拉病毒(ebov)是对人类致命的病原体之一,病毒感染引起严重出血热,致死率可达90%。病毒进入宿主细胞是感染过程中的头一步也是关键的一步,但其入侵机制仍有待研究。
近,*武汉病毒研究所研究员崔宗强与长春工业大学教授单玉萍、纳米科学中心研究员施兴华合作,基于单颗粒力示踪、动力学模拟和单颗粒荧光示踪技术,实时揭示了单个ebov的入侵动态过程和动力学机制。
研究人员首先构建了丝状埃博拉病毒样颗粒(ebo-vlp)并对其进行荧光标记,该丝状结构ebo-vlp和野生型ebov具有同样的入侵细胞能力,但其内部没有病毒核酸,不能复制。研究人员利用双功能peg linker将ebo-vlp连接到原子力显微镜的探针上,通过力示踪技术实时监测单个ebo-vlp内吞进入细胞的动态过程。
结果发现,ebo-vlp可以通过水平或垂直两种模式进入细胞,两种模式对应的力和时间不同。对两种模式进行分子动力学模拟,也说明ebo-vlp以垂直方向进入细胞比水平模式所需时间更长,所需能量(也就是力)更大。通过分析计算力示踪检测到的内吞力信号,推测大约有九个受体结合位点在ebo-vlp入侵过程中参与病毒内吞。实时单颗粒荧光示踪显示ebo-vlp与细胞巨胞饮标志物能够很好地共定位,并具有相同的运动速率、轨迹、均方位移等,巨胞饮抑制剂可以显着抑制其入侵,从而可视化地证实了ebo-vlp是以巨胞饮途径入侵细胞。
该研究实时动态解析了单个ebo-vlp入侵宿主细胞过程,揭示了丝状ebo-vlp以水平或垂直两种模式进入细胞,以及对应的力学、时-空、能量、与受体作用方式、入侵途径等精细机制,对深入理解ebov的感染机理具有重要意义,也为开发抗病毒途径提供了基础。
采用ausbian进口特级胎牛血清,透析过滤去除10000d以下小分子(如次黄嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子对细胞产生干扰。适合脉冲示踪实验(例如同位素标记特定小分子,并加入到培养体系中,以研究细胞代谢),也适合转染cho后的筛选等应用。
关于热灭活
胎牛血清不*热灭活。
热灭活一般是指在做免疫相关的试验中,通过加热灭活掉血清中的补体,以避免对免疫试验的影响。
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