食品中防腐剂和甜味剂的高效液相色谱仪（HPLC）检测方案
食品中防腐剂和甜味剂的高效液相色谱仪(hplc)检测方案食品加工工艺和防腐的需要，以及为了改善食品品质和色、味、香，在食品生产加工过程中，食品中通常会加入少量的天然或者化学合成的物质。近几年，由于食品安全问题层出不穷，人们越来越重视食品添加剂所带来的安全隐患。
以下是苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的详细检测方法。
1、仪器与试剂
1.1 仪器
高效液相色谱仪
vertex 色谱柱 250mm×4.6mm×5μm； 超声波水浴振荡器；
食品粉碎机；
ph 计；
天平：分度值为0.001 mg。
1.2 试剂
甲醇：色谱纯
乙酸铵溶液：称取1.54 g 乙酸铵，加水溶解并稀释至 1000 ml，经 0.45μm 微孔滤膜过滤。 亚铁氰话钾溶液：称取 106 g 亚铁青化钾[k3fe(cn)6•3h2o]加水至 1000 ml。
乙酸锌溶液：称取220g 乙酸锌[zn(ch3coo)2•2h20]溶于少量水中，加入 30ml 冰乙酸，加水稀释至l000ml。
氨水(1+1)：氨水与水等体积混合。
2、色谱条件
色谱柱：vertex c18 柱，250mm x 4.6 mm，5μm； 流动相：甲醇+0.02mol/l 乙酸铵溶液(5:95)； 流速：1 ml／min；
进样量：20μl； 检测波长 230nm。
3、试样溶液的制备
3.1 含脂肪、蛋白的样品
称取约10g 左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约 60ml 蒸馏水，再超声波水浴振荡10 分钟，然后用转移到 100ml 比色管中，并用少量水润洗干净烧杯； 加入 5ml 亚铁氰化价溶液，摇匀，再加入 5 ml 乙酸锌溶液，摇匀； 根据 ph 计读数，用氨水调节 ph 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤； 吸取滤液约 1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
3.2 不含脂肪、蛋白的样品
称取约10g 左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约 60ml 蒸馏水，再超声波水浴振荡10 分钟，然后转移到 100ml 比色管中，并用少量水润洗干净烧杯； 根据 ph 计读数，用氨水调节 ph 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤； 吸取滤液约 1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；混合标准溶液色谱图
4、结果分析
4.1 仪器精 确度的测定
取浓度为苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度为10.0ug/ml，平行测定 7 次。
表1：精 确 度的测定结果
分析结果可以得出，每个组分峰面积的相对标准偏差均小于1％，表明仪器在选定条件下重现性好， *可以满足分析测定的要求。
4.2 回收率的测定
分析结果的准确度可以用回收率来衡量。回收率越接近100％，测得的结果越接近真值，即准确度越好。 同时平行测定结果的相对标准偏差可以表明方法的重现性。
取清凉茶、样品分别进行加标实验，加入苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度均为10.00ug/ml 标 准溶液，平行测样 7 次，进行回收率实验。测定结果见表 2。
表2：清凉茶的加标测定结果和回收率
从上表可以看出清凉茶的加标测定的回收率：苯甲酸为98.5%-103.4%，山梨酸为 98.3%-103.1%，糖 精钠为 97.5%-104.3%,安赛蜜为 98.4%-103.3%。各组分的回收率都接近 ，满足日常检测的要求。
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vertex 色谱柱 250mm×4.6mm×5μm； 超声波水浴振荡器；
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ph 计；
天平：分度值为0.001 mg。
1.2 试剂
甲醇：色谱纯
乙酸铵溶液：称取1.54 g 乙酸铵，加水溶解并稀释至 1000 ml，经 0.45μm 微孔滤膜过滤。 亚铁氰话钾溶液：称取 106 g 亚铁青化钾[k3fe(cn)6•3h2o]加水至 1000 ml。
乙酸锌溶液：称取220g 乙酸锌[zn(ch3coo)2•2h20]溶于少量水中，加入 30ml 冰乙酸，加水稀释至l000ml。
氨水(1+1)：氨水与水等体积混合。
2、色谱条件
色谱柱：vertex c18 柱，250mm x 4.6 mm，5μm； 流动相：甲醇+0.02mol/l 乙酸铵溶液(5:95)； 流速：1 ml／min；
进样量：20μl； 检测波长 230nm。
3、试样溶液的制备
3.1 含脂肪、蛋白的样品
称取约10g 左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约 60ml 蒸馏水，再超声波水浴振荡10 分钟，然后用转移到 100ml 比色管中，并用少量水润洗干净烧杯； 加入 5ml 亚铁氰化价溶液，摇匀，再加入 5 ml 乙酸锌溶液，摇匀； 根据 ph 计读数，用氨水调节 ph 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤； 吸取滤液约 1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
3.2 不含脂肪、蛋白的样品
称取约10g 左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约 60ml 蒸馏水，再超声波水浴振荡10 分钟，然后转移到 100ml 比色管中，并用少量水润洗干净烧杯； 根据 ph 计读数，用氨水调节 ph 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤； 吸取滤液约 1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；混合标准溶液色谱图
4、结果分析
4.1 仪器精 确度的测定
取浓度为苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度为10.0ug/ml，平行测定 7 次。
表1：精 确 度的测定结果
分析结果可以得出，每个组分峰面积的相对标准偏差均小于1％，表明仪器在选定条件下重现性好， *可以满足分析测定的要求。
4.2 回收率的测定
分析结果的准确度可以用回收率来衡量。回收率越接近100％，测得的结果越接近真值，即准确度越好。 同时平行测定结果的相对标准偏差可以表明方法的重现性。
取清凉茶、样品分别进行加标实验，加入苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度均为10.00ug/ml 标 准溶液，平行测样 7 次，进行回收率实验。测定结果见表 2。
表2：清凉茶的加标测定结果和回收率
从上表可以看出清凉茶的加标测定的回收率：苯甲酸为98.5%-103.4%，山梨酸为 98.3%-103.1%，糖 精钠为 97.5%-104.3%,安赛蜜为 98.4%-103.3%。各组分的回收率都接近 ，满足日常检测的要求。
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