血清淀粉酶(AMY)活性检测试剂盒 (碘-淀粉比色法) (微量法)说明书

血清淀粉酶(amy)活性检测试剂盒 (碘-淀粉比色法)
(微量法)
产品货号:ba1930
产品规格:100t/48s
产品简介:
血清淀粉酶( serum amylase,amy) 属于α-淀粉酶,以无规则方式水解多糖分子内部的α-1,4糖苷键,生成寡聚糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。amy主要由唾液腺和胰腺分泌,另外近端十二指肠、肺、子宫、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。
amy催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等,碘可以与未被水解的淀粉结合, 生成在570nm下有特征吸收峰的复合物,其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成:
试剂名称
规格
保存条件
试剂一
粉剂×1瓶
2-8℃
试剂二
液体30ml×1瓶
2-8℃
试剂三a
粉剂×1支
2-8℃
试剂三b
粉剂×1瓶
2-8℃
标准品
粉剂×1瓶
2-8℃
溶液的配制:
1.试剂一:临用前加入12.5ml试剂二,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解;用不完的试剂2-8℃保存1个月。
2.试剂三的配制:将试剂三a倒入试剂三b中,用蒸馏水定容至10ml,2-8℃避光保存一个月。
3.标准品:10mg淀粉标准品。临用前加10ml试剂二,置于常温水中并加热至煮沸,配成1mg/ml淀粉标准液。用不完的试剂2-8℃保存1个月。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅/培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取
取40μl血清和160μl蒸馏水混合(即将血清稀释5倍),分为2管100μl分别作为测定管和对照管。若实验后所测数值偏大或者偏小,可以调整稀释比例(比如数值偏小可以将80μl血清和120μl蒸馏水混合即将血清稀释2.5倍)
二、测定步骤和加样表
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
2.将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/ml的标准溶液。
3.按操作表依次加入各试剂:
试剂(μl)
测定管
对照管
空白管1
标准管
空白管2
血清稀释液
100
100
-
-
-
蒸馏水
-
-
100
-
100
标准溶液
-
-
-
100
-
试剂一
100
-
100
-
-
试剂二
-
100
-
100
100
在37℃恒温水浴中准确保温10min
试剂三
50
50
50
50
50
混匀后吸取200μl于微量玻璃比色皿或者96孔板中,于15min内读取测定管、对照管、空白管1、标准管、空白管2在570nm下的吸光度,分别记为a测定、a对照、a空白1、a标准和a空白2,计算δa测定=(a空白1-a空白2)-(a测定-a对照),δa标准=a标准-a空白2。
三、amy活性计算
1.标准曲线的绘制:
以δa标准为y轴,以标准溶液浓度为x轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。将δa测定带入方程得到x (mg/ml)。
2.按照血清体积计算:
单位定义:每ml血清每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。
amy活性 (u/ml)= x×v样÷v样÷t×f =0.1×x×f
v样:加入反应体系中样本体积,0.1ml;t:反应时间,10min;f:稀释倍数。
注意事项:
1.δa测定大于1.5时,可以对样本进行适当稀释后测定。
2.反应完成后需在15min内测定吸光度。

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