SN/T 5444-2022出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的测定
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
sn/t 5444-2022
出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的测定
液相色谱-质谱/质谱法
determination of prochloraz and its metabolites in
plant-origin foodstuffs for export-lc-ms/ms
1范围
本文件规定了出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于蔬菜、水果、食用菌、谷物、油料、坚果、香辛料、茶叶、石斛中咪鲜胺及其代谢物n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44595）、n-醛基-n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44596）、2，4，6-三氯苯酚（bts45186）的定量测定和确证，其他植物源性食品也可参照使用。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
gb 2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4方法原理
试样经酸化乙腈溶液提取，提取液经quechers/固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。
5试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
5.1乙腈：色谱纯。
5.2乙酸：优级纯。
5.3甲苯：色谱纯。
5.4甲酸。
5.5无水硫酸镁。
5.6氯化钠。
5.7乙酸铵。
5.8乙酸钠。
5.9 1%酸化乙腈溶液（v/v）：990 ml乙腈（5.1）中加入10 ml乙酸（5.2）溶液，混匀。
5.10乙腈-甲苯溶液（3+1，v/v）：100 ml甲苯（5.3）加入300 ml乙腈（5.1）中，混匀。
5.11 2 mmol/l乙酸铵（含0.1 %甲酸）：称取0.154 g乙酸铵（5.7），用950 ml水溶解，加入1.0 ml甲酸（5.4），用水稀释至1 000 ml。
5.12乙二胺-n-丙基硅烷化硅胶（psa）：40μm~60μm。
5.13石墨化碳黑（gcb）：40μm~60μm。
5.14标准物质：咪鲜胺、n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44595）、n-醛基-n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44596）、2，4，6-三氯苯酚（bts45186），纯度均大于等于98%。化合物详细信息参见表a.1。
5.15混合标准储备液（1.0 mg/ml）：准确称取适量的咪鲜胺及其代谢物标准物质（5.14），用乙腈（5.1）溶解并配制成浓度为1.0 mg/ml的混合标准储备液。-18℃以下避光保存6个月。
5.16混合标准中间液（10.0 mg/l）：移取上述1.0 mg/ml混合标准储备液（5.15）0.1 ml至10 ml容量瓶中，用乙腈（5.1）稀释并定容至刻度，配制成10.0 mg/l混合标准中间液。0℃~4℃避光保存1个月。
5.17混合标准工作液：临用前分别取适量10.0 mg/l混合标准中间液（5.16），用乙腈（5.1）稀释至2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml混合标准工作液，临用现配。
5.18微孔滤膜：有机系，0.22μm。
5.19固相萃取柱：石墨化炭黑-氨基复合柱，500 mg/500 mg，容积6 ml。
5.20均质子。
6仪器和设备
6.1液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（esi）。
6.2分析天平：感量分别为0.01 g和0.1 mg。
6.3均质器。
6.4离心机：转速不低于5 000 r·min-1。
6.5超声波清洗器。
6.6氮吹仪。
6.7涡旋混合器。
6.8强力振荡器。
6.9组织搅拌机。
6.10高速粉粹机。
6.11水浴旋转蒸发仪。
6.12具塞离心管：聚丙烯，15 ml和50 ml。
7试样的制备与保存
7.1蔬菜、水果和食用菌
取有代表性样品约500 g，样品取样部位按照gb 2763的规定执行，用组织搅拌机充分绞碎，装入洁净容器，密闭并标明标记，于-18℃保存。
7.2谷物、油料、坚果、香辛料、茶叶和石斛
取有代表性样品约500 g，样品取样部位按照gb 2763的规定执行，用高速粉碎机充分粉碎，装入洁净容器，密闭并标明标记，于阴凉干燥处保存。
8测定步骤
8.1提取
8.1.1蔬菜、水果和食用菌
准确称取10 g（精确至0.01 g）试样，置于50 ml具塞离心管中，加入20 ml酸化乙腈（5.9）、6.0 g氯化钠（5.6）及1颗均质子（5.20），盖上离心管盖，置于强力振荡器（6.8）剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min，待净化。
注：对于干制样品，称取1 g试样（精确至0.01 g）于50 ml具塞离心管中，加9 ml水涡旋混匀，静置30 min后按上述方式处理。
8.1.2谷物、油料、坚果、香辛料和石斛
准确称取5 g（精确至0.01 g）试样，置于50 ml具塞离心管中，加入10 ml水涡旋混匀，静置20 min，加入20 ml酸化乙腈（5.9）、6.0 g氯化钠（5.6）及1颗均质子（5.20），盖上离心管盖，置于强力振荡器（6.8）剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min，待净化。
8.1.3茶叶
准确称取2 g（精确至0.01 g）试样，置于50 ml具塞离心管中，加入10 ml水涡旋混匀，静置20 min，加入20 ml酸化乙腈（5.9）、6.0 g硫酸镁（5.5）、1.5 g乙酸钠（5.8）及1颗均质子（5.20），盖上离心管盖，置于强力振荡器（6.8）剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min。吸取10 ml上清液于100 ml茄型瓶中，40℃水浴旋转蒸发至1 ml左右，氮吹至近干，待净化。
8.2净化
8.2.1 quechers前处理
吸取待净化液（8.1.1、8.1.2）10 ml加到内含900 mg硫酸镁（5.5）、100 mgpsa（5.12））和10 mggcb（5.13）的15 ml塑料离心管中，涡旋混匀5 min后4 000 r·min-1离心5 min，准确吸取5 ml上清液于10 ml试管中，氮吹至干，加入2 ml乙腈（5.1）溶解残渣，过微孔滤膜（5.18），供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。
8.2.2固相萃取前处理
用5 ml乙腈-甲苯溶液（5.10）预洗固相萃取柱（5.19），弃去流出液。用3 ml乙腈-甲苯溶液（5.10）洗涤待净化试样（8.1.3）至固相萃取柱中，再用3ml乙腈-甲苯溶液（5.10）重复洗涤操作1次；用20 ml乙腈-甲苯溶液（5.10）淋洗固相萃取柱。收集所有流出液，于40℃水浴旋转蒸发至干，加入1 ml乙腈（5.1）溶解残渣，过微孔滤膜（5.18），供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。
8.3基质混合标准溶液的制备
空白基质样品按照8.1、8.2部分进行前处理至氮吹至干或旋转蒸发至干，加入相应质量浓度的混合标准工作溶液（5.17）复溶，过微孔滤膜（5.18），基质混合标准工作溶液应现用现配。
注：空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。
8.4样品测定
8.4.1液相色谱-质谱/质谱参考条件
8.4.1.1 esi+模式液相色谱条件
8.4.1.1.1色谱柱：c18柱，100 mm×2.1 mm（内径），粒径1.7μm，或相当者。
8.4.1.1.2流动相：流动相a为乙腈（5.1），流动相b为水，梯度洗脱程序见表1。
8.4.1.1.3流速：0.3 ml/min。
8.4.1.1.4进样量：1μl。
8.4.1.1.5柱温：40℃。
8.4.1.2 esi-模式液相色谱条件
8.4.1.2.1色谱柱：c18柱，100 mm×2.1 mm（内径），粒径1.7μm，或相当者。
8.4.1.2.2流动相：流动相a为乙腈（5.1），b为乙酸铵水（5.11），梯度洗脱程序见表2。
8.4.1.2.3流速：0.5 ml/min。
8.4.1.2.4进样量：10μl。
8.4.1.2.5柱温：40℃。
8.4.1.3质谱条件
8.4.1.3.1离子源：电喷雾离子源。
8.4.1.3.2扫描方式：正、负离子模式。
8.4.1.3.3检测方式：多反应监测（mrm）。
8.4.1.3.4质谱/质谱参考条件参见附录b。
8.4.2定性测定
在相同实验条件下进行样品测定时，样品中待测物质的保留时间与标准溶液的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
8.4.3定量测定
按8.4.1条件对基质混合标准工作溶液和样液进行测定，外标法定量。样液中待测组分的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下咪鲜胺及代谢产物bts44595、bts44596、2，4，6-三氯苯酚的参考保留时间分别为5.80 min、5.55 min、5.73 min、2.81 min。标准溶液的多反应监测（mrm）色谱图参见图c.1~图c.4。
8.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
9结果计算和表述
9.1按式（1）计算试样中咪鲜胺及其代谢物的含量。
式中：
xi——试样中各待测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
ci——试样溶液中各待测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）；
c0——空白试验溶液中待测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）；
v——试样溶液定容体积，单位为毫升（ml）；
f——稀释因子；
m——试样质量，单位为克（g）。
当测定结果小于0.1 mg/kg，结果保留到小数点后四位；当测定结果大于等于0.1 mg/kg，结果保留三位有效数字。计算结果应扣空白。
9.2按照式（2）计算样品中咪鲜胺及其代谢物总量（以咪鲜胺计）的含量。
式中：
x总——试样中咪鲜胺及其代谢物总量（以咪鲜胺计）的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
x咪——试样中咪鲜胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
1.157——bts44595转换为咪鲜胺的转化系数；
xbts44595——试样中bts44595的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
xbts44596——试样中bts44596的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
1.065——bts44596转换为咪鲜胺的转化系数；
xbts45186——试样中bts45186的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
1.908——bts45186转换为咪鲜胺的转化系数。
10定量限和回收率
10.1定量限
咪鲜胺、n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44595）、n-醛基-n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44596）、2，4，6-三氯苯酚（bts45186）的方法定量限均为：0.010 0 mg/kg。
10.2回收率
不同样品基质中咪鲜胺及其代谢物的添加浓度水平和回收率范围参见附录d。
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出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的测定
液相色谱-质谱/质谱法
determination of prochloraz and its metabolites in
plant-origin foodstuffs for export-lc-ms/ms
1范围
本文件规定了出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于蔬菜、水果、食用菌、谷物、油料、坚果、香辛料、茶叶、石斛中咪鲜胺及其代谢物n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44595）、n-醛基-n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44596）、2，4，6-三氯苯酚（bts45186）的定量测定和确证，其他植物源性食品也可参照使用。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
gb 2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4方法原理
试样经酸化乙腈溶液提取，提取液经quechers/固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。
5试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
5.1乙腈：色谱纯。
5.2乙酸：优级纯。
5.3甲苯：色谱纯。
5.4甲酸。
5.5无水硫酸镁。
5.6氯化钠。
5.7乙酸铵。
5.8乙酸钠。
5.9 1%酸化乙腈溶液（v/v）：990 ml乙腈（5.1）中加入10 ml乙酸（5.2）溶液，混匀。
5.10乙腈-甲苯溶液（3+1，v/v）：100 ml甲苯（5.3）加入300 ml乙腈（5.1）中，混匀。
5.11 2 mmol/l乙酸铵（含0.1 %甲酸）：称取0.154 g乙酸铵（5.7），用950 ml水溶解，加入1.0 ml甲酸（5.4），用水稀释至1 000 ml。
5.12乙二胺-n-丙基硅烷化硅胶（psa）：40μm~60μm。
5.13石墨化碳黑（gcb）：40μm~60μm。
5.14标准物质：咪鲜胺、n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44595）、n-醛基-n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44596）、2，4，6-三氯苯酚（bts45186），纯度均大于等于98%。化合物详细信息参见表a.1。
5.15混合标准储备液（1.0 mg/ml）：准确称取适量的咪鲜胺及其代谢物标准物质（5.14），用乙腈（5.1）溶解并配制成浓度为1.0 mg/ml的混合标准储备液。-18℃以下避光保存6个月。
5.16混合标准中间液（10.0 mg/l）：移取上述1.0 mg/ml混合标准储备液（5.15）0.1 ml至10 ml容量瓶中，用乙腈（5.1）稀释并定容至刻度，配制成10.0 mg/l混合标准中间液。0℃~4℃避光保存1个月。
5.17混合标准工作液：临用前分别取适量10.0 mg/l混合标准中间液（5.16），用乙腈（5.1）稀释至2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml混合标准工作液，临用现配。
5.18微孔滤膜：有机系，0.22μm。
5.19固相萃取柱：石墨化炭黑-氨基复合柱，500 mg/500 mg，容积6 ml。
5.20均质子。
6仪器和设备
6.1液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（esi）。
6.2分析天平：感量分别为0.01 g和0.1 mg。
6.3均质器。
6.4离心机：转速不低于5 000 r·min-1。
6.5超声波清洗器。
6.6氮吹仪。
6.7涡旋混合器。
6.8强力振荡器。
6.9组织搅拌机。
6.10高速粉粹机。
6.11水浴旋转蒸发仪。
6.12具塞离心管：聚丙烯，15 ml和50 ml。
7试样的制备与保存
7.1蔬菜、水果和食用菌
取有代表性样品约500 g，样品取样部位按照gb 2763的规定执行，用组织搅拌机充分绞碎，装入洁净容器，密闭并标明标记，于-18℃保存。
7.2谷物、油料、坚果、香辛料、茶叶和石斛
取有代表性样品约500 g，样品取样部位按照gb 2763的规定执行，用高速粉碎机充分粉碎，装入洁净容器，密闭并标明标记，于阴凉干燥处保存。
8测定步骤
8.1提取
8.1.1蔬菜、水果和食用菌
准确称取10 g（精确至0.01 g）试样，置于50 ml具塞离心管中，加入20 ml酸化乙腈（5.9）、6.0 g氯化钠（5.6）及1颗均质子（5.20），盖上离心管盖，置于强力振荡器（6.8）剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min，待净化。
注：对于干制样品，称取1 g试样（精确至0.01 g）于50 ml具塞离心管中，加9 ml水涡旋混匀，静置30 min后按上述方式处理。
8.1.2谷物、油料、坚果、香辛料和石斛
准确称取5 g（精确至0.01 g）试样，置于50 ml具塞离心管中，加入10 ml水涡旋混匀，静置20 min，加入20 ml酸化乙腈（5.9）、6.0 g氯化钠（5.6）及1颗均质子（5.20），盖上离心管盖，置于强力振荡器（6.8）剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min，待净化。
8.1.3茶叶
准确称取2 g（精确至0.01 g）试样，置于50 ml具塞离心管中，加入10 ml水涡旋混匀，静置20 min，加入20 ml酸化乙腈（5.9）、6.0 g硫酸镁（5.5）、1.5 g乙酸钠（5.8）及1颗均质子（5.20），盖上离心管盖，置于强力振荡器（6.8）剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min。吸取10 ml上清液于100 ml茄型瓶中，40℃水浴旋转蒸发至1 ml左右，氮吹至近干，待净化。
8.2净化
8.2.1 quechers前处理
吸取待净化液（8.1.1、8.1.2）10 ml加到内含900 mg硫酸镁（5.5）、100 mgpsa（5.12））和10 mggcb（5.13）的15 ml塑料离心管中，涡旋混匀5 min后4 000 r·min-1离心5 min，准确吸取5 ml上清液于10 ml试管中，氮吹至干，加入2 ml乙腈（5.1）溶解残渣，过微孔滤膜（5.18），供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。
8.2.2固相萃取前处理
用5 ml乙腈-甲苯溶液（5.10）预洗固相萃取柱（5.19），弃去流出液。用3 ml乙腈-甲苯溶液（5.10）洗涤待净化试样（8.1.3）至固相萃取柱中，再用3ml乙腈-甲苯溶液（5.10）重复洗涤操作1次；用20 ml乙腈-甲苯溶液（5.10）淋洗固相萃取柱。收集所有流出液，于40℃水浴旋转蒸发至干，加入1 ml乙腈（5.1）溶解残渣，过微孔滤膜（5.18），供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。
8.3基质混合标准溶液的制备
空白基质样品按照8.1、8.2部分进行前处理至氮吹至干或旋转蒸发至干，加入相应质量浓度的混合标准工作溶液（5.17）复溶，过微孔滤膜（5.18），基质混合标准工作溶液应现用现配。
注：空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。
8.4样品测定
8.4.1液相色谱-质谱/质谱参考条件
8.4.1.1 esi+模式液相色谱条件
8.4.1.1.1色谱柱：c18柱，100 mm×2.1 mm（内径），粒径1.7μm，或相当者。
8.4.1.1.2流动相：流动相a为乙腈（5.1），流动相b为水，梯度洗脱程序见表1。
8.4.1.1.3流速：0.3 ml/min。
8.4.1.1.4进样量：1μl。
8.4.1.1.5柱温：40℃。
8.4.1.2 esi-模式液相色谱条件
8.4.1.2.1色谱柱：c18柱，100 mm×2.1 mm（内径），粒径1.7μm，或相当者。
8.4.1.2.2流动相：流动相a为乙腈（5.1），b为乙酸铵水（5.11），梯度洗脱程序见表2。
8.4.1.2.3流速：0.5 ml/min。
8.4.1.2.4进样量：10μl。
8.4.1.2.5柱温：40℃。
8.4.1.3质谱条件
8.4.1.3.1离子源：电喷雾离子源。
8.4.1.3.2扫描方式：正、负离子模式。
8.4.1.3.3检测方式：多反应监测（mrm）。
8.4.1.3.4质谱/质谱参考条件参见附录b。
8.4.2定性测定
在相同实验条件下进行样品测定时，样品中待测物质的保留时间与标准溶液的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
8.4.3定量测定
按8.4.1条件对基质混合标准工作溶液和样液进行测定，外标法定量。样液中待测组分的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下咪鲜胺及代谢产物bts44595、bts44596、2，4，6-三氯苯酚的参考保留时间分别为5.80 min、5.55 min、5.73 min、2.81 min。标准溶液的多反应监测（mrm）色谱图参见图c.1~图c.4。
8.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
9结果计算和表述
9.1按式（1）计算试样中咪鲜胺及其代谢物的含量。
式中：
xi——试样中各待测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
ci——试样溶液中各待测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）；
c0——空白试验溶液中待测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）；
v——试样溶液定容体积，单位为毫升（ml）；
f——稀释因子；
m——试样质量，单位为克（g）。
当测定结果小于0.1 mg/kg，结果保留到小数点后四位；当测定结果大于等于0.1 mg/kg，结果保留三位有效数字。计算结果应扣空白。
9.2按照式（2）计算样品中咪鲜胺及其代谢物总量（以咪鲜胺计）的含量。
式中：
x总——试样中咪鲜胺及其代谢物总量（以咪鲜胺计）的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
x咪——试样中咪鲜胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
1.157——bts44595转换为咪鲜胺的转化系数；
xbts44595——试样中bts44595的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
xbts44596——试样中bts44596的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
1.065——bts44596转换为咪鲜胺的转化系数；
xbts45186——试样中bts45186的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
1.908——bts45186转换为咪鲜胺的转化系数。
10定量限和回收率
10.1定量限
咪鲜胺、n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44595）、n-醛基-n-丙基-n-[2-（2，4，6-三氯苯氧基）乙基]脲（bts44596）、2，4，6-三氯苯酚（bts45186）的方法定量限均为：0.010 0 mg/kg。
10.2回收率
不同样品基质中咪鲜胺及其代谢物的添加浓度水平和回收率范围参见附录d。
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