实验室支原体污染现状及常用检测方法对比
支原体模式图自1956年研究人员在细胞培养中发现支原体污染以来，支原体污染问题无处不在。[1]支原体污染非常不易察觉。有的实验室被支原体污染后，如果不进行有效的支原体检测并清除，该实验的细胞培养很难进行下去，细胞传代3代以后状态就急剧下滑，无法进行正常实验，甚至需要更换细胞间。综合fda、美国模式菌种收集中心（atcc）等机构收到的相关数据，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。[2]一项来自宾夕法尼亚大学的研究显示，在ncbi的2012-2013年的geo项目中，约11％含有支原体污染[3]，支原体污染已经成为细胞培养工作中的问题之一。
支原体污染细胞的后果
支原体污染是个循序的过程，因其没有细胞壁，普通抗生素对其无效[4]。根据已发表的支原体污染研究文献，支原体污染细胞后，几乎能影响每一个细胞参数。其可能导致细胞染色体的异常和损伤，改变细胞的代谢、生长、形状、附着，甚至会影响到基因表达。此外，支原体污染能耗尽营养物，促进代谢积累，重度支原体污染还将导致培养基ph改变。
为了全面了解支原体污染情况，来自加州大学的john hogenesch教授获得了九千多份样本的rna测序数据，这些样本来自于2012年-2013年间哺乳动物细胞的基因表达研究[3]。john在测序数据中寻找支原体dna，结果发现11%的样本都受到了支原体的污染。
据john表示，支原体dna水平的一些研究，曾发表在cell、nature和pnas等杂志上。虽然支原体污染并不一定意味着这些研究结果无效，但这种微生物会影响数百个基因的表达，并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在其中一组淋巴瘤细胞受污染的数据中，john鉴定出了61个被支原体改变的基因。由此可见，支原体感染能在不知不觉中干扰研究结果，浪费大量的科研资金和宝贵的时间——john的实验室曾遇到过一次支原体污染，虽然问题很快得到解决，但仍然浪费了大约十万美元和一年的研究。
在细胞培养的各个环节，都容易受到支原体污染，比如操作人员的疏忽、培养基更换时操作不规范、细胞在实验室间流通时缺乏质控等，由于细胞受到支原体污染时形态不易发生变化，因此很难通过简单观察辨别细胞是否收到了污染，等到发现细胞感染了支原体时，已经为时已晚。
支原体检测方法对比
最近十年里，有两种经典的方法被用于常规支原体检测，它们的灵敏度和可靠性已经获得了证实：培养法和指示细胞培养法。在过去几年里，支原体检测对速度快、灵敏度高且稳健性高的需求日益增加。
在分子检测技术出现之前，传统的培养方法一直是微生物检测的金标准，迄今为止，范围内仍将它作为支原体常规检测方案。不同于培养法，指示细胞培养方法通过对培养物的dna染色来判断是否存在支原体生长。可用于某些“挑剔”的支原体检测，因为这些支原体不能在用于培养方法的标准培养基中生长。
除了以上两种药典认证的方法外，目前实验室常用的方法还有dna荧光染色法、pcr扩增技术、环介导的等温扩增法等。通常需要一种操作简单，耗时较短，灵敏度较高，结构准确的方法以应对日常检测的需求，其中pcr扩增技术、环介导的等温扩增法以耗时短见长，而dna荧光染色法和生长抑制试验因操作简单受到青睐，以下是各种方法的优势对比。
几种检测方法对比
一般来说，新的细胞株都需要做支原体检测，细胞培养期间，建议每1-2周进行一次支原体检测以防止污染。以上列举的检测支原体方法各有优势，但是即便通常被认为是“金标准”的培养法，也可能会漏掉某些需要特殊培养条件的“精挑细选”的支原体。因此，在实验室的日常研究需求中，需要一种快速、全面的检测方法以应对日常的检测需求。
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支原体检测试剂盒专属性、检测限和耐用性这3个方面特性均符合要求，可替代培养法，用于细胞存储库、细胞治疗用途的细胞和生物制品过程中的支原体污染检测。
应用场景：日常监控
实验室定期监控细胞培养过程中是否发生了支原体污染；
经过了细胞培养过程，即便初始污染的量很少，支原体也会在培养过程中迅速增殖；
每隔3-5个工作日进行定期质控，支原体的数量已经增殖到非常巨大的量。即便不抽提核酸，也可以非常准确地鉴定出发生了支原体污染。
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