elabscience annexin v-fitc / pi细胞凋亡检测试剂盒是用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡试剂盒。那么你知道annexin v-fitc / pi细胞凋亡检测试剂盒的操作方法有哪些吗?让我们一起来看看吧!
一步法
1.细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300 ×g 离心5 min,弃上清,收集细胞,pbs洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。
2.取 1~5 × 105 重悬的细胞,300 ×g 离心 5 min,弃上清。用 pbs 洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入500 μl稀释的1 × annexin v binding buffer重悬细胞。
3.细胞悬液中加入5μl的annexin v-fitc reagent和5μl的 pi reagent (50μg/ml)。
4.轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15~20 min。
5.立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。
注:流式细胞仪检测时annexin v-fitc可用fitc通道,pi 优先选择percp/cy5.5 通道,其次是ecd通道。
两步法
1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300 ×g离心5 min,弃上清,收集细胞,pbs 洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。
2. 取1~5 × 105重悬的细胞,300 ×g离心 5 min,弃上清。用 pbs 洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入100 μl 稀释的 1 × annexin v binding buffer 重悬细胞。
3. 细胞悬液中加入 2.5 μl 的 annexin v-fitc reagent 和2.5 μl的pi reagent (50μg/ml)。(由于两步法 分辨率更高,染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果;用户亦可根据自己的模型进行滴定后 加入适量的染色液,用更少的量获得高质量的结果。)
4. 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育 15~20 min。
5. 加入 400 μl 稀释的1 × annexin v binding buffer,混匀样本。
6. 立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。 注:流式细胞仪检测时annexin v-fitc 可用 fitc 通道,pi优先选择 percp/cy5.5 通道,其次是 ecd 通道。
更多有关elabscience annexin v-fitc / pi细胞凋亡检测试剂盒的操作方法,请联系elabscience试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司。
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