首医大朱进霞：NKCC2（离子转运体）参与胃酸分泌的实时生理证据
nmt作为生命科学底层核心技术，是建立活体创新科研平台的*技术。2005年~2020年，nmt已扎根中国15年。2020年，中国nmt销往瑞士苏黎世大学，正式打开欧洲市场。
基本信息
主题： nkcc2（离子转运体）参与胃酸分泌的实时生理证据
期刊：european journal of pharmacology
影响因子：3.17
研究使用平台：nmt活体组织创新科研平台
标题：na+-k+-2cl- cotransporter 2 located in the human and murine gastric mucosa is involved in secretagogue-induced gastric acid secretion and is downregulated in lipopolysaccharide-treated mice
作者：首都医科大学朱进霞、郑丽飞
检测离子/分子指标
h+
检测样品
小鼠胃黏膜活体组织
中文摘要（谷歌机翻）
na+-k+-2cl-转运蛋白（nkcc）在胃壁细胞中的表达异常高。*是一种强效的利尿剂，可阻断nkcc，通常会导致胃酸分泌减少。内毒素血症在体内引起低血脂症，其中脂多糖（lps）起着重要作用。这项研究旨在调查nkcc2对lps治疗的小鼠胃酸分泌及其改变的影响。非损伤微测技术（non-invasive micro-test technology，nmt）和实时ph滴定结合rna干扰被用来确定*对胃酸分泌的影响。进行了免疫化学和蛋白质印迹研究以调查lps处理的小鼠中nkcc2表达的变化。nkcc1和nkcc2的免疫反应性主要观察到壁细胞的基底外侧和顶膜附近。用*预处理可降低小鼠胃粘膜中组胺刺激的h+流速。*的顶端而不是基底外侧的添加抑制了福司可林或组胺/3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（ibmx）诱导的胃酸分泌。nkcc2 sirna的体内治疗可抑制毛喉素诱导的酸分泌。在组胺刺激后，大部分nkcc2靶向胃粘膜和原代培养的壁细胞中的顶膜。lps处理的小鼠的胃黏膜中nkcc2和囊泡相关膜蛋白2（vamp2）的表达降低，但h+/k+-atpase的表达没有降低。*阻断顶叶nkcc2而不是基底外侧nkcc1可抑制促分泌素诱导的胃酸分泌，在此期间可能需要nkcc2的膜运输。nkcc2和vamp2的下调可能与lps诱导的胃酸分泌减少有关。
离子/分子流实验处理方法
10 μm布美他尼、100 μm组胺、300 μm*分别处理小鼠胃黏
离子/分子流实验结果
图1b所示的折线图是使用nmt技术监测小鼠胃黏膜h+流速变化的结果。加入组胺（100 μm）引起h+流速增加，从0.52±0.02增加到0.74±0.03 pmol cm-2 s-1，这被组胺h2受体拮抗剂*（300 μm）抑制（图1c）。*（10 μm）预处理可明显抑制组胺诱导的h+流速，但对基础h+流速无影响，表明nkcc在促酸分泌中起作用。
图1 不同处理下小鼠胃黏膜h+流速的变化情况
其他实验结果
双重染色免疫荧光结果表明，nkcc1的免疫反应性（ir）主要出现在表达h+/k+-atpase的细胞的基底外侧膜，nkcc2 ir在小鼠和人胃粘膜中h+/k+-atpase阳性细胞的顶端侧突出。在培养的大鼠胃壁细胞中也观察到nkcc2 ir。nkcc2信号也作为阳性对照在小鼠和大鼠肾脏中进行研究，发现在肾小管的顶端观察到强烈的nkcc2 ir。
在静息条件下，*在腔管或浆膜的处理均未显著抑制胃酸分泌。这些结果表明，抑制顶端膜上高表达的nkcc2，可以显著抑制促分泌素诱导的胃酸分泌。
nkcc2基因敲除可降低forskolin刺激的胃酸分泌。
组胺刺激nkcc2在胃粘膜和培养壁细胞中的易位。
脂多糖（lipopolysaccharide，lps）处理的小鼠中nkcc2和vamp2表达降低。
结论
本研究揭示了nkcc2（*的腔管靶点）在维持胃酸分泌中的重要性。特别是，我们提出的证据表明nkcc2的膜转位可能与酸分泌有关。这些发现为胃酸分泌的复杂机制提供了新的见解。nkcc2和vamp2的下调可能与lps诱导的胃酸分泌减少有关。
离子流实验使用的测试液
141.8 mm nacl, 5.9 mm kcl, 1.2 mm mgcl2, 10 mm hepes acid, 5.6 mm tris, 2.56 mm cacl2, 2 g glucose, ph 7.4
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基本信息
主题： nkcc2（离子转运体）参与胃酸分泌的实时生理证据
期刊：european journal of pharmacology
影响因子：3.17
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标题：na+-k+-2cl- cotransporter 2 located in the human and murine gastric mucosa is involved in secretagogue-induced gastric acid secretion and is downregulated in lipopolysaccharide-treated mice
作者：首都医科大学朱进霞、郑丽飞
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中文摘要（谷歌机翻）
na+-k+-2cl-转运蛋白（nkcc）在胃壁细胞中的表达异常高。*是一种强效的利尿剂，可阻断nkcc，通常会导致胃酸分泌减少。内毒素血症在体内引起低血脂症，其中脂多糖（lps）起着重要作用。这项研究旨在调查nkcc2对lps治疗的小鼠胃酸分泌及其改变的影响。非损伤微测技术（non-invasive micro-test technology，nmt）和实时ph滴定结合rna干扰被用来确定*对胃酸分泌的影响。进行了免疫化学和蛋白质印迹研究以调查lps处理的小鼠中nkcc2表达的变化。nkcc1和nkcc2的免疫反应性主要观察到壁细胞的基底外侧和顶膜附近。用*预处理可降低小鼠胃粘膜中组胺刺激的h+流速。*的顶端而不是基底外侧的添加抑制了福司可林或组胺/3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（ibmx）诱导的胃酸分泌。nkcc2 sirna的体内治疗可抑制毛喉素诱导的酸分泌。在组胺刺激后，大部分nkcc2靶向胃粘膜和原代培养的壁细胞中的顶膜。lps处理的小鼠的胃黏膜中nkcc2和囊泡相关膜蛋白2（vamp2）的表达降低，但h+/k+-atpase的表达没有降低。*阻断顶叶nkcc2而不是基底外侧nkcc1可抑制促分泌素诱导的胃酸分泌，在此期间可能需要nkcc2的膜运输。nkcc2和vamp2的下调可能与lps诱导的胃酸分泌减少有关。
离子/分子流实验处理方法
10 μm布美他尼、100 μm组胺、300 μm*分别处理小鼠胃黏
离子/分子流实验结果
图1b所示的折线图是使用nmt技术监测小鼠胃黏膜h+流速变化的结果。加入组胺（100 μm）引起h+流速增加，从0.52±0.02增加到0.74±0.03 pmol cm-2 s-1，这被组胺h2受体拮抗剂*（300 μm）抑制（图1c）。*（10 μm）预处理可明显抑制组胺诱导的h+流速，但对基础h+流速无影响，表明nkcc在促酸分泌中起作用。
图1 不同处理下小鼠胃黏膜h+流速的变化情况
其他实验结果
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在静息条件下，*在腔管或浆膜的处理均未显著抑制胃酸分泌。这些结果表明，抑制顶端膜上高表达的nkcc2，可以显著抑制促分泌素诱导的胃酸分泌。
nkcc2基因敲除可降低forskolin刺激的胃酸分泌。
组胺刺激nkcc2在胃粘膜和培养壁细胞中的易位。
脂多糖（lipopolysaccharide，lps）处理的小鼠中nkcc2和vamp2表达降低。
结论
本研究揭示了nkcc2（*的腔管靶点）在维持胃酸分泌中的重要性。特别是，我们提出的证据表明nkcc2的膜转位可能与酸分泌有关。这些发现为胃酸分泌的复杂机制提供了新的见解。nkcc2和vamp2的下调可能与lps诱导的胃酸分泌减少有关。
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141.8 mm nacl, 5.9 mm kcl, 1.2 mm mgcl2, 10 mm hepes acid, 5.6 mm tris, 2.56 mm cacl2, 2 g glucose, ph 7.4
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