人胚胎绒毛膜细胞​提取物培养操作

人胚胎绒毛膜细胞提取物培养操作:
产品仅供科研使用1)复苏细胞:将含有 1ml 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4ml 培养基混合均 匀。在 1000rpm 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2ml 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 pbs 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%trypsin-0.53mm edta)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000rpm 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2ml 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 t25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,pbs 清洗一遍后加入 1ml yi酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 dmso,轻轻混匀,dmso 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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关键词:显微镜 血球计数板

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