蛋白质印迹——膜选择
pvdf膜和nc膜作为western印迹应用中的两种类型的膜，各有什么特点？我们该如何选择？
印迹所使用的膜的类型可能影响下列因素：
•蛋白质结合能力
•是否需要用醇预湿
•开展多次剥离(stripping)和再生检测(reprobing)实验的能力
•蛋白质观察
•长期印迹保存
•信噪比
聚偏二氟乙烯(pvdf)和硝酸纤维素是western印迹应用中的两种类型的膜。
与硝酸纤维素膜相比，电转到pvdf膜上有许多优点。pvdf膜可提供更好的蛋白质截留率、物理强度和广泛的化学兼容性(pluskal等，1986)。其中更高的机械强度和出色的耐化学性让pvdf膜成为免疫检测中各种染色应用和二次检测的理想选择。使用pvdf膜的另一个优点是，单块凝胶上的平行重复泳道可用于各种应用中，如考马斯蓝染色，接着切割条带进行n端测序，蛋白质水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测(kurien等，2003)。市售的硝酸纤维素膜的典型结合能力是80 – 100 μg/cm2，而pvdf膜的结合能力是100 – 200 μg/cm2。
在检测血清中人免疫缺陷病毒(hiv)时直接比较pvdf和硝酸纤维素膜，结果表明，pvdf膜有着更好的总体hiv抗原截留率，并且有助于改善提高抗体对糖基化包膜抗原的检测(lauritzen和 pluskal，1998)。硝酸纤维素膜和pvdf膜的特性比较详见表1。
表1. pvdf和硝酸纤维素膜特性及应用的比较
特性/应用 硝酸纤维素 pvdf
物理强度 差 好
蛋白质结合能力 80 – 100 μg/cm2 100 – 300 μg/cm2
耐溶剂性 否 是
western转移 是 是
总蛋白染料 胶体金 胶体金
丽春红 丽春红
氨基黑 氨基黑
印度墨汁 印度墨汁
sypro®印迹染料 考马斯蓝染料
检测 显色 显色
化学发光 化学发光
荧光 荧光
放射性 化学荧光
放射性
双印迹方法 否 是
快速免疫检测 否 是
western再次杂交 是 是
edman测序 否 是
氨基酸分析 是 是
sds存在下的结合 差 好
膜上消化或质谱分析 否 是
直接maldi-tof ms分析 否 是
数据可存档 否 是
默克密理博提供四种pvdf膜：
• immobilon®-p膜(0.45 μm)是一种通用的基质，适用于一般的免疫印迹应用。
• immobilon®-psq膜(0.2 μm)适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。
• immobilon®-fl膜(0.45 μm)是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。
• immobilon®-e膜(0.45 μm)是个用于蛋白质印迹的pvdf膜，可以用水性转移缓冲液润湿。这省去了其他pvdf膜所需的酒精预湿步骤。
immobilon®转印膜以卷膜和方片膜形式提供。预切好的膜与所有预制胶以及大部分市售的凝胶电泳系统兼容。immobilon®转印膜的性质详见表2。表3列出了与的电泳系统相匹配的immobilon®预切膜的尺寸。表4列出了与现有的预制胶相匹配的immobilon®预切膜的尺寸。
表2. immobilon® pvdf转印膜的性质和应用
immobilon®-p转印膜 immobilon®-psq转印膜 immobilon®-fl转印膜 immobilon®-e pvdf膜
描述 为结合从各种凝胶基质上转移的蛋白质而优化 均一的孔径结构带来分子量<20 kda的蛋白质的出色结合 为荧光免疫检测应用而优化 用于蛋白质印迹的pvdf膜，可以用水性转移缓冲液润湿
组成 pvdf pvdf pvdf pvdf
孔径大小 0.45 μm 0.2 μm 0.45 μm 0.45 μm
疏水性 疏水 疏水 疏水 疏水
应用 western印迹 低分子量 western印迹 western印迹
结合分析 western印迹 斑点/狭缝印迹
氨基酸分析 氨基酸分析 荧光免疫检测
n端蛋白测序 质谱分析
斑点/狭缝印迹 n端蛋白测序
糖蛋白观察
脂多糖分析
质谱分析
检测方法 显色 显色 荧光 化学发光
化学荧光 荧光 显色 显色
化学发光 化学荧光 化学荧光 放射性
放射性 化学发光 化学发光
放射性
蛋白质结合能力 胰岛素：160 μg/cm2 胰岛素：262 μg/cm2 胰岛素：155 μg/cm2 胰岛素：160 μg/cm2
bsa：215 μg/cm2 bsa：340 μg/cm2 bsa：205 μg/cm2 bsa：215 μg/cm2
山羊igg：294 μg/cm2 山羊igg：448 μg/cm2 山羊igg：300 μg/cm2 山羊igg：294 μg/cm2
兼容的可逆染料 透射法 透射法 透射法 透射法
丽春红 丽春红 丽春红 丽春红
cpts cpts cpts sypro® ruby
甲苯胺蓝 甲苯胺蓝 sypro印迹染料
sypro®印迹染料 sypro印迹染料
兼容的不可逆染料 考马斯亮蓝染料 考马斯亮蓝染料 考马斯亮蓝染料 考马斯亮蓝
氨基黑 氨基黑 氨基黑 氨基黑
印度墨汁 印度墨汁
印度墨汁
胶体金 胶体金
胶体金
表3. immobilon® pvdf预切转印膜和匹配的电泳系统
manufacturer vertical gel box gel size(cm) immobilon® size (cm) immobilon® now format compatible immobilon®-p 0.45 μm immobilon®-psq 0.2 μm immobilon®-fl 0.45 μm* immobilon®-e 0.45 μm
ge healthcare se 250 mighty small™ 8 × 7 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
se 260 mighty small™ 8 × 9.5 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
minive 8 × 9.5 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
8.5 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
se 400 14 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
se 600 14 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
14 × 8 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
bio-rad mini-protean® 3 dodeca™ 8.3 × 7.3 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
criterion™, criterion™ dodeca™ 13.3 × 8.7 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
protean® ii xi 16 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
16 × 20 26.5 × 375
ipvh00010 iseq00010 ipfl00010
protean® ii xl 19.3 × 18.3 20 × 20
ipvh20200 iseq20200 ipfl20200
protean® plus dodeca™ 20 × 20.5 26 × 26
iseq304f0 iseq304f0
mini-protean® tetra 8.3 × 7.3 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
invitrogen xcell surelock™ mini-cell 8 × 8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
xcell4 surelock™ midi 8 × 13 8.5 × 13.5 ■ ipvh08130 iseq08130
thermo scientific owl® p81, p82, p8ds 10 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
owl® p82, p8ds 8 × 10 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
owl® p9ds 16 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
owl® p10ps 20 × 20.5 20 × 20
ipvh20200 iseq20200 ipfl20200
表4. immobilon® pvdf预切转印膜和匹配的预制胶
manufacturer vertical gel box gel size(cm) immobilon® size (cm) immobilon® now format compatible immobilon®-p 0.45 μm immobilon®-psq 0.2 μm immobilon®-fl 0.45 μm* immobilon®-e 0.45 μm
bio-rad mini-protean™ tgx, mini-protean™ tgx stain-free 8.6 × 6.8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810
criterion™ tgx, criterion™ tgx stain-free, criterion™ tris-hcl, criterion™ stain-free tris-hcl, criterion™ xt bis-tris 13.3 × 8.7 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
lonza pager® gold 9 × 10 8 × 10 ■ ipvh08100 iseq08100
ievh08100
10 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
nusep nuview tris-glycine, stain free 8.6 × 6.8 8.4 × 7
ipvh08100 iseq08100 ipfl07810 ievh07850
8 × 8 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
invitrogen nupage® , bolt® 8 × 8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
novex® 8 × 8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
e-page 13.5 × 10.8 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
expedeon runblue™ teo-tricine sds 8 × 10 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
runblue™ tris-bis 10 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
genscript expressplus™ 8 × 10 8 × 10
ipvh08100 iseq08100 ipfl10100 ievh08100
surepage™ 8.6 × 6.8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
millipore sigma mpage™ 8.6 × 6.8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
电池安全应该得到高度重视!
上海印发《上海市实施生活垃圾定时定点分类投放制度工作导则》
气动软密封蝶阀
FESTO控制阀的腐蚀与防护方之间有些什么区别
人黑色素细胞抗体（MC Ab）ELISA检测试剂盒 使用说明书
蛋白质印迹——膜选择
滤芯过滤器作用与原理
深芬仪器ATP微生物快检技术获突破5分钟可查ATP菌落总数
管道热收缩带-管道热收缩套
300KN外置式数显拉压力计
偏摆仪测量端面圆跳动的方法
上海简户共享恒温培养箱的注意事项
在安装与使用耐腐蚀旋涡风机时有哪些注意事项呢
泉瓦特斯阀门通过五大类阀门TS认证评审
电子吊秤的优点
材料比表面分析仪：探索微观世界的神奇工具
玻璃钢工艺管道参数表
接头热熔套 黑皮子厂家 聚乙烯热缩带
年产3万吨白灰球磨机全自动化生产效果好
水浴圆形氮吹浓缩仪
印迹所使用的膜的类型可能影响下列因素：
•蛋白质结合能力
•是否需要用醇预湿
•开展多次剥离(stripping)和再生检测(reprobing)实验的能力
•蛋白质观察
•长期印迹保存
•信噪比
聚偏二氟乙烯(pvdf)和硝酸纤维素是western印迹应用中的两种类型的膜。
与硝酸纤维素膜相比，电转到pvdf膜上有许多优点。pvdf膜可提供更好的蛋白质截留率、物理强度和广泛的化学兼容性(pluskal等，1986)。其中更高的机械强度和出色的耐化学性让pvdf膜成为免疫检测中各种染色应用和二次检测的理想选择。使用pvdf膜的另一个优点是，单块凝胶上的平行重复泳道可用于各种应用中，如考马斯蓝染色，接着切割条带进行n端测序，蛋白质水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测(kurien等，2003)。市售的硝酸纤维素膜的典型结合能力是80 – 100 μg/cm2，而pvdf膜的结合能力是100 – 200 μg/cm2。
在检测血清中人免疫缺陷病毒(hiv)时直接比较pvdf和硝酸纤维素膜，结果表明，pvdf膜有着更好的总体hiv抗原截留率，并且有助于改善提高抗体对糖基化包膜抗原的检测(lauritzen和 pluskal，1998)。硝酸纤维素膜和pvdf膜的特性比较详见表1。
表1. pvdf和硝酸纤维素膜特性及应用的比较
特性/应用 硝酸纤维素 pvdf
物理强度 差 好
蛋白质结合能力 80 – 100 μg/cm2 100 – 300 μg/cm2
耐溶剂性 否 是
western转移 是 是
总蛋白染料 胶体金 胶体金
丽春红 丽春红
氨基黑 氨基黑
印度墨汁 印度墨汁
sypro®印迹染料 考马斯蓝染料
检测 显色 显色
化学发光 化学发光
荧光 荧光
放射性 化学荧光
放射性
双印迹方法 否 是
快速免疫检测 否 是
western再次杂交 是 是
edman测序 否 是
氨基酸分析 是 是
sds存在下的结合 差 好
膜上消化或质谱分析 否 是
直接maldi-tof ms分析 否 是
数据可存档 否 是
默克密理博提供四种pvdf膜：
• immobilon®-p膜(0.45 μm)是一种通用的基质，适用于一般的免疫印迹应用。
• immobilon®-psq膜(0.2 μm)适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。
• immobilon®-fl膜(0.45 μm)是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。
• immobilon®-e膜(0.45 μm)是个用于蛋白质印迹的pvdf膜，可以用水性转移缓冲液润湿。这省去了其他pvdf膜所需的酒精预湿步骤。
immobilon®转印膜以卷膜和方片膜形式提供。预切好的膜与所有预制胶以及大部分市售的凝胶电泳系统兼容。immobilon®转印膜的性质详见表2。表3列出了与的电泳系统相匹配的immobilon®预切膜的尺寸。表4列出了与现有的预制胶相匹配的immobilon®预切膜的尺寸。
表2. immobilon® pvdf转印膜的性质和应用
immobilon®-p转印膜 immobilon®-psq转印膜 immobilon®-fl转印膜 immobilon®-e pvdf膜
描述 为结合从各种凝胶基质上转移的蛋白质而优化 均一的孔径结构带来分子量<20 kda的蛋白质的出色结合 为荧光免疫检测应用而优化 用于蛋白质印迹的pvdf膜，可以用水性转移缓冲液润湿
组成 pvdf pvdf pvdf pvdf
孔径大小 0.45 μm 0.2 μm 0.45 μm 0.45 μm
疏水性 疏水 疏水 疏水 疏水
应用 western印迹 低分子量 western印迹 western印迹
结合分析 western印迹 斑点/狭缝印迹
氨基酸分析 氨基酸分析 荧光免疫检测
n端蛋白测序 质谱分析
斑点/狭缝印迹 n端蛋白测序
糖蛋白观察
脂多糖分析
质谱分析
检测方法 显色 显色 荧光 化学发光
化学荧光 荧光 显色 显色
化学发光 化学荧光 化学荧光 放射性
放射性 化学发光 化学发光
放射性
蛋白质结合能力 胰岛素：160 μg/cm2 胰岛素：262 μg/cm2 胰岛素：155 μg/cm2 胰岛素：160 μg/cm2
bsa：215 μg/cm2 bsa：340 μg/cm2 bsa：205 μg/cm2 bsa：215 μg/cm2
山羊igg：294 μg/cm2 山羊igg：448 μg/cm2 山羊igg：300 μg/cm2 山羊igg：294 μg/cm2
兼容的可逆染料 透射法 透射法 透射法 透射法
丽春红 丽春红 丽春红 丽春红
cpts cpts cpts sypro® ruby
甲苯胺蓝 甲苯胺蓝 sypro印迹染料
sypro®印迹染料 sypro印迹染料
兼容的不可逆染料 考马斯亮蓝染料 考马斯亮蓝染料 考马斯亮蓝染料 考马斯亮蓝
氨基黑 氨基黑 氨基黑 氨基黑
印度墨汁 印度墨汁
印度墨汁
胶体金 胶体金
胶体金
表3. immobilon® pvdf预切转印膜和匹配的电泳系统
manufacturer vertical gel box gel size(cm) immobilon® size (cm) immobilon® now format compatible immobilon®-p 0.45 μm immobilon®-psq 0.2 μm immobilon®-fl 0.45 μm* immobilon®-e 0.45 μm
ge healthcare se 250 mighty small™ 8 × 7 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
se 260 mighty small™ 8 × 9.5 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
minive 8 × 9.5 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
8.5 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
se 400 14 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
se 600 14 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
14 × 8 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
bio-rad mini-protean® 3 dodeca™ 8.3 × 7.3 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
criterion™, criterion™ dodeca™ 13.3 × 8.7 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
protean® ii xi 16 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
16 × 20 26.5 × 375
ipvh00010 iseq00010 ipfl00010
protean® ii xl 19.3 × 18.3 20 × 20
ipvh20200 iseq20200 ipfl20200
protean® plus dodeca™ 20 × 20.5 26 × 26
iseq304f0 iseq304f0
mini-protean® tetra 8.3 × 7.3 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
invitrogen xcell surelock™ mini-cell 8 × 8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
xcell4 surelock™ midi 8 × 13 8.5 × 13.5 ■ ipvh08130 iseq08130
thermo scientific owl® p81, p82, p8ds 10 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
owl® p82, p8ds 8 × 10 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
owl® p9ds 16 × 16 15 × 15
ipvh15150 iseq15150
owl® p10ps 20 × 20.5 20 × 20
ipvh20200 iseq20200 ipfl20200
表4. immobilon® pvdf预切转印膜和匹配的预制胶
manufacturer vertical gel box gel size(cm) immobilon® size (cm) immobilon® now format compatible immobilon®-p 0.45 μm immobilon®-psq 0.2 μm immobilon®-fl 0.45 μm* immobilon®-e 0.45 μm
bio-rad mini-protean™ tgx, mini-protean™ tgx stain-free 8.6 × 6.8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810
criterion™ tgx, criterion™ tgx stain-free, criterion™ tris-hcl, criterion™ stain-free tris-hcl, criterion™ xt bis-tris 13.3 × 8.7 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
lonza pager® gold 9 × 10 8 × 10 ■ ipvh08100 iseq08100
ievh08100
10 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
nusep nuview tris-glycine, stain free 8.6 × 6.8 8.4 × 7
ipvh08100 iseq08100 ipfl07810 ievh07850
8 × 8 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
invitrogen nupage® , bolt® 8 × 8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
novex® 8 × 8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
e-page 13.5 × 10.8 13.5 × 8.5 ■ ipvh08130 iseq08130
expedeon runblue™ teo-tricine sds 8 × 10 8 × 10
ipvh08100 iseq08100
ievh08100
runblue™ tris-bis 10 × 10 10 × 10
ipvh10100 iseq10100 ipfl10100
genscript expressplus™ 8 × 10 8 × 10
ipvh08100 iseq08100 ipfl10100 ievh08100
surepage™ 8.6 × 6.8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
millipore sigma mpage™ 8.6 × 6.8 8.4 × 7 ■ ipvh07850 iseq07850 ipfl07810 ievh07850
电池安全应该得到高度重视!
上海印发《上海市实施生活垃圾定时定点分类投放制度工作导则》
气动软密封蝶阀
FESTO控制阀的腐蚀与防护方之间有些什么区别
人黑色素细胞抗体（MC Ab）ELISA检测试剂盒 使用说明书
蛋白质印迹——膜选择
滤芯过滤器作用与原理
深芬仪器ATP微生物快检技术获突破5分钟可查ATP菌落总数
管道热收缩带-管道热收缩套
300KN外置式数显拉压力计
偏摆仪测量端面圆跳动的方法
上海简户共享恒温培养箱的注意事项
在安装与使用耐腐蚀旋涡风机时有哪些注意事项呢
泉瓦特斯阀门通过五大类阀门TS认证评审
电子吊秤的优点
材料比表面分析仪：探索微观世界的神奇工具
玻璃钢工艺管道参数表
接头热熔套 黑皮子厂家 聚乙烯热缩带
年产3万吨白灰球磨机全自动化生产效果好
水浴圆形氮吹浓缩仪