液相色谱法测定人血浆中齐留通

齐留通是一种在体内和体外有效的选择性5.脂氧合酶抑制剂,临床应用为其外消旋体。由美国公司研制开发,1997年3月在美国上市。齐留通可以直接抑制5.脂氧合酶的活性,减少白三烯的合成,从而减轻支气管内炎症,降低气道反应性,达到控制哮喘发作的治疗目的。
为研究齐留通在中国健康志愿者体内的药物动力学,需要建立灵敏可靠的生物样品的分析方法。国外有文献采用hplc-uv法测定生物样品齐留通浓度,其定量限均可达到0.01mg/l,但血浆样品的处理采用固相萃取。
血浆样品经液液萃取的齐留通hplc-uv血药浓度测定法,定量限为0.0781mg/l。该法准确+灵敏且回收率高,可用于齐留通临床血药浓度的监测、药物动力学和生物利用度研究。
检测仪器:液相色谱仪,工作站,台式高速离心机,微量旋涡混合仪。
色谱条件:流动相:(20mmol/l,ph4.0左右)-乙腈-四氢呋喃(75:25:5)流速1.5ml/min;柱温35℃;检测波长260nm。
测定方法:精密称取齐留通和乙酰苯胺适量,以甲醇分别配成1000mg/l齐留通的对照储备液和64mg/l的内标储备液。用蒸馏水稀释储备液得到相应浓度的工作溶液,置0℃冰箱保存待用。
取血浆样品0.5ml,加入乙酰苯胺溶液(64mg/l)50µl,混匀。加入二氯甲烷-无水乙醇(9:1)6ml,旋涡混匀2min,2500r/min离心5min,取下清液,置35℃水浴中氮气吹干。残渣用甲醇-水(1:1)100µl溶解,进样20µl,记录色谱图及峰面积。以齐留通的峰面积与内标峰面积的比值定量。
关键词:液相色谱仪 高速离心机

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