酶联免疫实验易错之处

在操作酶联免疫试剂盒实验时,有很多技术问题是比较常见且易错的,而就是这些问题困惑不少实验操作员。小编根据技术部的问题处理总结,整理出了几个比较常见的问题,跟着小编一起往下看吧:
一、为什么必须设置复孔?
为获得更准确的实验结果,强烈建议标准品及样本进行复孔检测,因为复孔检测可以:计算平均值,确保实验结果更准确;解决实验中误操作造成的跳孔现象;计算cv值,对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。
如图
二、重复性差怎么办?
1.样品数量不一,加样时间长短不一(重复某一样品时,加样时间尽可能与di一次接近)。
2.酶标仪滤光片不对或输入波长不对(tmb显色用450/630波长)。
3.酶标仪测定重复性差(校对酶标仪)。
三、为什么标准曲线线性较差?
需要按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心,*收集粉末;确保标准品*溶解和混匀,然后再进行后续的系列稀释步骤,确保每一步都充分混匀且移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
四、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?
温度是elisa结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应,实验前务必将所有试剂平衡至室温,包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致elisa检测结果的不准确。

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