PCR技术的基本原理、各步骤的目的是什么？
你知道pcr技术的基本原理、各步骤的目的是什么吗？让我们一起来看看吧！
一、pcr技术基本原理
pcr是一种选择性体外快速扩增dna片段的方法。在体外以类似于细胞内dna的半保留复制过程，以拟扩增的模板dna分子，与模板dna互补的寡核苷酸引物、dna聚合酶、4种dntp及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的dna链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。
pcr包含下列三步反应：
1、变性(denaturation)
将反应体系混合物经加热至94℃左右，维持较短的时间，使双链dna变成单链dna，便于下一步引物的结合。
2、退火(annealing)
将反应体系温度下降到特定温度（一般是引物的tm值以下)，引物与dna模板以碱基互补的方式结合，形成模板-引物杂交双链。退火温度是保证引物与dna模板互补结合的关键。由于引物结构简单，加之引物量远远大于模板dna的数量，所以dna模板单链之间的互补结合很少。
3、延伸(elongation)
将反应体系的温度上升到72℃左右并维持一段时间，在taq dna聚合酶的作用下，以引物为起始点，以4种单核苷酸（dntp）为底物，从5'→3'方向延伸反应，合成新的dna双链。
以上三步反应为一个循环，重复进行变性、退火、延伸这三步反应，如此反复循环可以使dna以指数形式进行扩增。上述过程1.5小时左右完成，从而使所需的目的dna片段扩增放大百万倍。
二、pcr各步骤目的
1、预变性
破坏dna中可能存在较难破坏的二级结构。使dna充分变性，减少dna复杂结构对扩增的影响，以利于引物更好地和模板结合，特别是对于基因组来源的dna模板，最好不要省去这个步骤。此外，在一些使用热启动taq酶的反应中，还可激活taq酶，从而使pcr反应得以顺利进行。
2、变性一退火一延伸循环
(1)模板dna的变性
模板dna经加热至93℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双徒dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备。
(2)模板dna与引物的退火（复性）
模板dna经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合。
(3)引物的延伸
dna模板—引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
3、pcr仪扩增循环后72℃延伸10分钟
用pcr仪扩增时，变性一退火一延伸循环完成后，继续72℃延伸10分钟的原因是：
(1)在反应体系一定的条件下，延伸时间取决于待扩增dna片段的长度。例如，使用taq dna聚合酶，72℃时的碱基掺入率为35~100bp/s，因此延伸速率为1kb/min。
(2)根据延伸速率推得，扩增1kb以内的dna片段1分钟即可，而3~4kb则需要3~4分钟，依次类推。通常，在最后一轮要适当地将延伸时间延长至4~10分钟，这样做是使pcr反应wan全以提高扩增产量。
(3)继续72℃延伸10分钟除了可以使pcr反应wan全以提高扩增产量外，还有一个作用是：在用普通taq酶进行pcr扩增时在产物末端加a尾的作用，可以直接用于ta克隆的进行。
更多有关pcr的基本原理与各步骤的目的，请联系天津益元利康生物科技有限公司：
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3、延伸(elongation)
将反应体系的温度上升到72℃左右并维持一段时间，在taq dna聚合酶的作用下，以引物为起始点，以4种单核苷酸（dntp）为底物，从5'→3'方向延伸反应，合成新的dna双链。
以上三步反应为一个循环，重复进行变性、退火、延伸这三步反应，如此反复循环可以使dna以指数形式进行扩增。上述过程1.5小时左右完成，从而使所需的目的dna片段扩增放大百万倍。
二、pcr各步骤目的
1、预变性
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2、变性一退火一延伸循环
(1)模板dna的变性
模板dna经加热至93℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双徒dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备。
(2)模板dna与引物的退火（复性）
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(3)引物的延伸
dna模板—引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
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(3)继续72℃延伸10分钟除了可以使pcr反应wan全以提高扩增产量外，还有一个作用是：在用普通taq酶进行pcr扩增时在产物末端加a尾的作用，可以直接用于ta克隆的进行。
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