聚合酶链反应(pcr)技术是一种对特定的靶核酸片段在体外进行快速扩增的方法,通常由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成,通过不同温度的循环实现靶核酸的扩增。
实时荧光pcr技术是在pcr技术基础上发展起来的核酸扩增与实时检测技术,将荧光染料或荧光探针引入pcr反应体系,利用每一温度循环荧光信号的积累实时监测整个pcr进程。由于在pcr扩增的指数时期,荧光信号达到设定阈值时反应的循环数(ct值)和被测模板的起始拷贝数存在线性关系,因而可用来进行定性及定量分析。
聚合酶链式反应(pcr)是一种用于放大扩增特定的dna片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊dna复制,pcr的最大特点是能将微量的dna大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的dna,就能用pcr加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易dna扩增法,意味着pcr技术的真正诞生。到如今2013年,pcr已发展到第三代技术。1976年,中国科学家钱嘉韵,发现了稳定的taq dna聚合酶,为pcr技术发展也做出了基础性贡献。
pcr是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°c左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至dna聚合酶最适反应温度(72°c左右),dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的pcr仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
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