鹅雌激素ELISA检测试剂盒操作步骤

鹅雌激素elisa检测试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/l,120 ng/l ,60 ng/l,30 ng/,15 ng/l)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48t的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48t的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠toll样受体-4(mouse tlr-4)
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1(mouse timp-1)
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(mouse timp-2)
小鼠肿瘤坏死因子-a(mouse tnf-a)
小鼠肿瘤坏死因子-b(mouse tnf-b)
小鼠肿瘤坏死因子-r(mouse tnf-r)
小鼠组织纤溶酶原激活剂(mouse t-pa)
小鼠转铁蛋白(mouse transferrin)
小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse tslp)
小鼠血栓烷b2(mouse txb2)
小鼠可溶性肿瘤坏死因子-a受体(mouse stnf-ar)
小鼠组织多肽抗原(mouse tpa)
小鼠血小板生成素(mouse tpo)
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(mouse trail/apo 2l)
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(mouse trail r1)
小鼠敏感蛋白-1(mouse tsp-1)
小鼠血栓调节蛋白(mouse tm)
小鼠型纤溶酶原激活物(mouse upa)
小鼠型纤溶酶原激活物受体(mouse upa-r)
小鼠血管细胞粘附分子-1(mouse svcam-1)

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