使用 PROTRAP 进行自上而下的样品制备
准备注意事项protrap xg 设备经过优化，可处理 50 μg 蛋白质。对于可重现和最大的蛋白质沉淀，沉淀过程中样品中的最大sds含量应为1%。如果您的提取或裂解缓冲液含有超过 1% sds，请使用最大离子强度为 300 mm 的缓冲液稀释。离心速度基于带 24 x 1.5/2.0 ml 转子的标准台式微量离心机。提供的时间仅供参考。如果过滤滤芯中残留的液体超过几微升，请将其返回到离心机并重复旋转，或考虑提高旋转速度。建议在后续旋转中使用 3000 ×g （6000 rpm），protrap xg 已经过高达 9000 ×g （10，000 rpm） 的测试。
所需材料所有化学品和试剂应为acs级/hplc级或更高。丙酮5 m 氯化钠水溶液80%甲酸水溶液（冷却至–20°c）冷冻水
自上而下的样品制备方案
对于可重现和最大的蛋白质沉淀，沉淀过程中样品中的最大sds含量应为1%。如果您的提取或裂解缓冲液含有超过 1% sds，请使用最大离子强度为 300 mm 的缓冲液稀释。 为获得最佳体验，样品应至少含有 50 mm nacl。 如果需要添加氯化钠，请使用 5 m 氯化钠溶液。
不要让过滤滤芯中的膜在步骤之间变干。
将塞子拧到滤芯的底座上。
将 100 μl 稀释的样品蛋白转移到堵塞的过滤柱中。
加入 400 μl 室温丙酮。
盖上过滤滤芯并轻轻摇晃，倾斜不超过 45°，以混合溶剂。
将过滤柱插入微量离心管中，等待 30 分钟，使蛋白质在室温下聚集。
连接塞子后，以 2500 × g （5000 rpm） 离心×2 分钟。
从微量离心管中取出过滤盒，倒置并拧下塞子。
将带盖的过滤柱放回微量离心管中，并以 500 × （2000 rpm） 离心×3 分钟。 丢弃通过溶剂的流量。 如果过滤滤芯中残留任何溶剂，请以 3000 ×g （6000 rpm） 的速度重新旋转装置 2-5 分钟。
用 400 μl 丙酮清洗蛋白质颗粒。立即以 500 × g (2000 rpm) × 2 分钟离心。丢弃流过洗涤溶剂的流。
更换插头。在 –20°c 下将过滤筒中的沉淀物冷却 10 分钟。
在水中加入 50 µl 冷 (-20°c) 80% 甲酸。盖上滤芯，放入冰箱 10 分钟，然后超声处理 1 分钟。
加入 450 µl 冷冻水；盖并涡旋以混合溶剂。
完整的蛋白质可以在干净的微量离心管中直接回收，以 350 × g (2000 rpm) × 5 分钟的速度离心。
如果需要进一步的蛋白质净化，再溶解的蛋白质也可以使用提供的可选 spe 小柱和 spe蛋白质/肽净化方案进行 spe 。
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将塞子拧到滤芯的底座上。
将 100 μl 稀释的样品蛋白转移到堵塞的过滤柱中。
加入 400 μl 室温丙酮。
盖上过滤滤芯并轻轻摇晃，倾斜不超过 45°，以混合溶剂。
将过滤柱插入微量离心管中，等待 30 分钟，使蛋白质在室温下聚集。
连接塞子后，以 2500 × g （5000 rpm） 离心×2 分钟。
从微量离心管中取出过滤盒，倒置并拧下塞子。
将带盖的过滤柱放回微量离心管中，并以 500 × （2000 rpm） 离心×3 分钟。 丢弃通过溶剂的流量。 如果过滤滤芯中残留任何溶剂，请以 3000 ×g （6000 rpm） 的速度重新旋转装置 2-5 分钟。
用 400 μl 丙酮清洗蛋白质颗粒。立即以 500 × g (2000 rpm) × 2 分钟离心。丢弃流过洗涤溶剂的流。
更换插头。在 –20°c 下将过滤筒中的沉淀物冷却 10 分钟。
在水中加入 50 µl 冷 (-20°c) 80% 甲酸。盖上滤芯，放入冰箱 10 分钟，然后超声处理 1 分钟。
加入 450 µl 冷冻水；盖并涡旋以混合溶剂。
完整的蛋白质可以在干净的微量离心管中直接回收，以 350 × g (2000 rpm) × 5 分钟的速度离心。
如果需要进一步的蛋白质净化，再溶解的蛋白质也可以使用提供的可选 spe 小柱和 spe蛋白质/肽净化方案进行 spe 。
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