碱性磷酸酶（AKP/ALP） 活性测定试剂盒 说明 技术文章
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碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，akp/alp） 活性测定试剂盒商品货号：qs2002
英文名称：tissue and blood alkaline phosphatase（akp/alp） assay kit
别名：组织及血液碱性磷酸酶试剂盒 akp/alp kit 组织及血液碱性磷酸酶（akp/alp）试剂盒
检测方法：常量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
qs2002-50管/24样 索桥生物 50管/24样 ￥160.00元
产品详细介绍
测定意义：
akp/alp是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。akp/alp广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：
在碱性环境中，akp/alp催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基*和六氰合铁酸钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算akp活性。
产品说明书货号: qs2002 规格：50管/24样
碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，akp/alp） 活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
akp/alp 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化 合物。akp/alp 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：
在碱性环境中，akp/alp 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基*和六氰合铁酸钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算 akp 活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1 支（ep 管中），2 μ mol/ml 酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：
按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：
按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管：取 ep 管，加入 20μ l 蒸馏水，200μ l 试剂二，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 空白管。
4. 标准管：取 ep 管，加入 20μ l 标准品，200μ l 试剂二，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 标准管。
5.对照管：取 ep 管，加入 20μ l 上清液，200μ l 蒸馏水，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 测定管。
6. 测定管：取 ep 管，加入 20μ l 上清液，200μ l 试剂二，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。
akp/alp 活性计算：
1. 血液中 akp/alp 活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
akp/alp 活力(μ mol/min /ml)= [c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反总] ÷v 样÷t=6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)
2. 组织、细菌或细胞中 akp/alp 活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
akp/alp(μ mol/min/mg prot)=[c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反 总]÷(cpr×v 样)÷t=6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管) ÷cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
akp/alp(μ mol/min/g 鲜重)=[c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反 总]÷(w×v 样÷v 样总)÷t=6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管) ÷w
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每 104个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。 akp/alp (μ mol/min/104 cell)= [c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反总]÷(细胞数量×v 样÷v 样总)÷t= 6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管) ÷ 细胞数量
c标准品：2μ mol/ml；v 反总：反应体系总体积（ml），1020μ l=1.02 ml； v 样：加入反应 体系中上清液体积（ml），0.020ml；v 样总：加入提取液体积，1ml；t：反应时间（min），15 min。
注意事项：
1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。
3.加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不*。
系列产品及价格
酯酶系列
qs2000 乙酰*酯酶（ache）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 200
ms2000 乙酰*酯酶（ache）测试盒 微量法 100管/96样 380
qs2001 组织及血液酸性磷酸酶（acp）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 160
ms2001 酸性磷酸酶（acp）测试盒 微量法 100管/48样 310
qs2002 组织及血液碱性磷酸酶（akp/alp）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 160
ms2002 碱性磷酸酶（akp/alp）测试盒 微量法 100管/48样 310
qs2003 羧酸酯酶（care）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 300
ms2003 羧酸酯酶（care）测试盒 微量法 100管/96样 590
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碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，akp/alp） 活性测定试剂盒商品货号：qs2002
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别名：组织及血液碱性磷酸酶试剂盒 akp/alp kit 组织及血液碱性磷酸酶（akp/alp）试剂盒
检测方法：常量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
qs2002-50管/24样 索桥生物 50管/24样 ￥160.00元
产品详细介绍
测定意义：
akp/alp是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。akp/alp广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：
在碱性环境中，akp/alp催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基*和六氰合铁酸钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算akp活性。
产品说明书货号: qs2002 规格：50管/24样
碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，akp/alp） 活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
akp/alp 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化 合物。akp/alp 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：
在碱性环境中，akp/alp 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基*和六氰合铁酸钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算 akp 活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1 支（ep 管中），2 μ mol/ml 酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：
按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：
按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管：取 ep 管，加入 20μ l 蒸馏水，200μ l 试剂二，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 空白管。
4. 标准管：取 ep 管，加入 20μ l 标准品，200μ l 试剂二，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 标准管。
5.对照管：取 ep 管，加入 20μ l 上清液，200μ l 蒸馏水，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 测定管。
6. 测定管：取 ep 管，加入 20μ l 上清液，200μ l 试剂二，200μ l 试剂三，混匀后置于 37℃ 水浴中保温 15min；加入试剂四 600μ l，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 a 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。
akp/alp 活性计算：
1. 血液中 akp/alp 活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
akp/alp 活力(μ mol/min /ml)= [c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反总] ÷v 样÷t=6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)
2. 组织、细菌或细胞中 akp/alp 活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
akp/alp(μ mol/min/mg prot)=[c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反 总]÷(cpr×v 样)÷t=6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管) ÷cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
akp/alp(μ mol/min/g 鲜重)=[c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反 总]÷(w×v 样÷v 样总)÷t=6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管) ÷w
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每 104个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。 akp/alp (μ mol/min/104 cell)= [c 标准品×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管)×v 反总]÷(细胞数量×v 样÷v 样总)÷t= 6.8×(a 测定管-a 对照管)÷(a 标准管-a 空白管) ÷ 细胞数量
c标准品：2μ mol/ml；v 反总：反应体系总体积（ml），1020μ l=1.02 ml； v 样：加入反应 体系中上清液体积（ml），0.020ml；v 样总：加入提取液体积，1ml；t：反应时间（min），15 min。
注意事项：
1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
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酯酶系列
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qs2001 组织及血液酸性磷酸酶（acp）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 160
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qs2002 组织及血液碱性磷酸酶（akp/alp）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 160
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qs2003 羧酸酯酶（care）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 300
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