抗亚碲酸盐大肠杆菌:型PCR进口试剂盒试剂准备
抗亚碲酸盐大肠杆菌:型pcr进口试剂盒试剂准备
1. dna模板
2．对应目的基因的特异引物（在pcr反应中，新合成的dna是要接在一小段序列上才能继续按照模板dna复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是dna也可以是rna，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×pcr buffer
4．2mm dntpmix：含datp、dctp、dgtp、dttp各2mm
5．taq酶操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×pcr buffer 5μl
dntp mixl 4μl
引物1（10pm） 2μl
引物2（10pm） 2μl
taq酶（2u/μl） 1μl
dna模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddh2o至 50 μl
视pcr仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置pcr仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，pcr产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．pcr的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μllufang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
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4．2mm dntpmix：含datp、dctp、dgtp、dttp各2mm
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1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×pcr buffer 5μl
dntp mixl 4μl
引物1（10pm） 2μl
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dna模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
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2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置pcr仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，pcr产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．pcr的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μllufang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
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