Hypoxyprobe产品Pimonidazole使用注意事项
pimonidazole是新型的组织细胞缺氧标记物，hypoxyprobe（hpi）公司拥有硝基咪唑类化合物特异性抗体，该抗体为公司专有技术，在此基础上hypoxyprobe公司开发了不同标记的特异性抗体，可用于：利用免疫组织化学，酶联免疫吸附试验和流式细胞仪技术分析对肿瘤细胞分析检测。
pimonidazole使用注意事项
1. animal studies 动物研究
研究正常或肿瘤组织缺氧首先通过静脉注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法给hypoxyprobe-1溶液，剂量为60mg/kg体重。比如，25g小鼠的探针用量为1.5mg/只小鼠。（高达400mg/kg的剂量用于小鼠无可见毒性或引起组织缺氧变化，但60mg/kg以成本给予良好的染色结果）。
给药后，hypoxyprobe-1分布到包括大脑的所有组织，且仅仅在氧浓度≤14μm（相当于po2=10mm hg，37℃）的细胞内与蛋白质巯基形成加合物。除了肿瘤之外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤含po2等于或低于10mm hg的细胞，也会结合hypoxyprobe-1。
2.tissue cultures 组织培养
通常情况下，细胞悬液置于含100-200μm hypoxyprobe-1的缺氧环境中孵育1-2h。之后细胞离心涂片、固定、ftic-mab1和anti-fitc chromogenic secondary染色。
常见问题解答（fao）
1.hypoxyprobe-1 探针如何溶解？
pimonidazole hcl 是弱碱性盐酸盐，水溶性非常好，一般建议溶解于116mg/ml 的中性生理盐水。
2.pimonidazole hcl剂量是多少？
对于常规的小动物大小比较均一的，例如：小鼠或大鼠，我们推荐：探针用量：60 mg/kg。从30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到，在此范围内的探针用量，不会由于血流效应而导致毒性或氧量的改变。对于体型较大个体，注射剂量依据个体的基础表面积而定。对于人样本，推荐剂量为：0.5 mg/m2，狗样本：0.28 mg/m2
3.pimonidazole hcl 探针是否能够渗透进入低氧大脑组织或脑肿瘤组织？
pimonidazole hcl可以自由渗透进入脑和脑肿瘤组织。
4.探针注射后，多久可以进行收获组织？
对于人体组织的一些研究表明，收获组织需要在免疫后15-24小时后检查。探针在血浆中的半衰期是5小时，因此16-24小时相当于3-5个探针半衰期循环。也就是说：在组织检查时：大概有1/8 到1/32 的探针仍存在，冷固定后，这样减少了非特异性染色，且低背景。
另外关于人类肿瘤研究表明，活组织检查应该在免疫后，1.5-4小时，然后组织及时转到液氮固定。这种方法背景也较低。小鼠血浆中的探针半衰期在0.25小时。这种情况下，采取1-2小时收获组织然后采取快速固定方法，可有效的消除背景。
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研究正常或肿瘤组织缺氧首先通过静脉注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法给hypoxyprobe-1溶液，剂量为60mg/kg体重。比如，25g小鼠的探针用量为1.5mg/只小鼠。（高达400mg/kg的剂量用于小鼠无可见毒性或引起组织缺氧变化，但60mg/kg以成本给予良好的染色结果）。
给药后，hypoxyprobe-1分布到包括大脑的所有组织，且仅仅在氧浓度≤14μm（相当于po2=10mm hg，37℃）的细胞内与蛋白质巯基形成加合物。除了肿瘤之外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤含po2等于或低于10mm hg的细胞，也会结合hypoxyprobe-1。
2.tissue cultures 组织培养
通常情况下，细胞悬液置于含100-200μm hypoxyprobe-1的缺氧环境中孵育1-2h。之后细胞离心涂片、固定、ftic-mab1和anti-fitc chromogenic secondary染色。
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1.hypoxyprobe-1 探针如何溶解？
pimonidazole hcl 是弱碱性盐酸盐，水溶性非常好，一般建议溶解于116mg/ml 的中性生理盐水。
2.pimonidazole hcl剂量是多少？
对于常规的小动物大小比较均一的，例如：小鼠或大鼠，我们推荐：探针用量：60 mg/kg。从30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到，在此范围内的探针用量，不会由于血流效应而导致毒性或氧量的改变。对于体型较大个体，注射剂量依据个体的基础表面积而定。对于人样本，推荐剂量为：0.5 mg/m2，狗样本：0.28 mg/m2
3.pimonidazole hcl 探针是否能够渗透进入低氧大脑组织或脑肿瘤组织？
pimonidazole hcl可以自由渗透进入脑和脑肿瘤组织。
4.探针注射后，多久可以进行收获组织？
对于人体组织的一些研究表明，收获组织需要在免疫后15-24小时后检查。探针在血浆中的半衰期是5小时，因此16-24小时相当于3-5个探针半衰期循环。也就是说：在组织检查时：大概有1/8 到1/32 的探针仍存在，冷固定后，这样减少了非特异性染色，且低背景。
另外关于人类肿瘤研究表明，活组织检查应该在免疫后，1.5-4小时，然后组织及时转到液氮固定。这种方法背景也较低。小鼠血浆中的探针半衰期在0.25小时。这种情况下，采取1-2小时收获组织然后采取快速固定方法，可有效的消除背景。
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