Elabscience一步法TUNEL流式凋亡检测试剂盒怎么用？
elabscience® one-step tunel flow cytometry apoptosis kit 是一款灵敏度高且能快速简便地检测细胞凋亡的产品。该试剂盒可通过流式细胞仪来进行悬浮细胞、贴壁细胞的流式凋亡检测。那么你知道elabscience一步法tunel流式凋亡检测试剂盒怎么用吗？让我们一起来看看吧！
一、实验步骤
1. 收集细胞并进行计数，每组取1×106个细胞，300×g 离心5 min，弃上清。
注：若样本为贴壁细胞，凋亡细胞会有部分悬浮于上清中，上清中的细胞也要收集。
2. 加入200 μl pbs（含 1%bsa）重悬细胞，加入200 μl fixation buffer，室温固定60 min（推荐使用摇转方式，或每 15 min 混匀一次）。
3. 加入1ml pbs（含 1%bsa），600×g 离心 5 min，弃上清。
4. 加入200 μl permeabilization buffer，冰上破膜 10 min。
注：破膜温度过高或者时间过久会导致细胞破碎，因此建议permeabilization buffer 解冻后放置在 4°c，待使用前取出；另外破膜时间最长不要超过15 min。
5. 加入1~2 ml pbs（含 1%bsa）终止破膜，轻轻吹打混匀后，600×g离心 5 min，弃上清。
6. 加入200 μl tdt equilibration buffer，轻轻吹打混匀，37°c平衡15 min。
7. 600×g离心5 min，弃上清，收集细胞沉淀。
8. 按照分组参考下表配制标记工作液，每个样本加入100μl反应液（充分混匀，现配现用）。
组分
检测样本
阴性对照
tdt equilibration buffer
70 μl
80 μl
labeling solution
20 μl
20 μl
tdt enzyme
10 μl
0 μl
注：
① tdt equilibration buffer 使用前，室温静置直至wan全溶解。冰冻的平衡液融化后可能会出现钴盐结晶，此为正常现象。使用前涡旋混匀。
② labeling solution 使用前，请置于冰上溶解，待wan全溶解后离心，用枪头吹打混匀。
③ tdt enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°c，使用前取出，使用后立即放回。
④ 配制标记工作液时，建议不要涡旋。
9. 37°c 避光孵育60 min（每 20 min 轻轻摇晃混匀细胞）。
10. 加入1ml stop solution轻轻吹打混匀，室温静置5 min，加入 300~500 μl pbs(含 1%bsa)，600×g离心 5 min，弃上清。
11. 加入 200 μl pbs（含 1%bsa）重悬细胞，上机检测。
更多有关elabscience一步法tunel流式凋亡检测试剂盒的使用方法，请联系elabscience试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司。
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注：若样本为贴壁细胞，凋亡细胞会有部分悬浮于上清中，上清中的细胞也要收集。
2. 加入200 μl pbs（含 1%bsa）重悬细胞，加入200 μl fixation buffer，室温固定60 min（推荐使用摇转方式，或每 15 min 混匀一次）。
3. 加入1ml pbs（含 1%bsa），600×g 离心 5 min，弃上清。
4. 加入200 μl permeabilization buffer，冰上破膜 10 min。
注：破膜温度过高或者时间过久会导致细胞破碎，因此建议permeabilization buffer 解冻后放置在 4°c，待使用前取出；另外破膜时间最长不要超过15 min。
5. 加入1~2 ml pbs（含 1%bsa）终止破膜，轻轻吹打混匀后，600×g离心 5 min，弃上清。
6. 加入200 μl tdt equilibration buffer，轻轻吹打混匀，37°c平衡15 min。
7. 600×g离心5 min，弃上清，收集细胞沉淀。
8. 按照分组参考下表配制标记工作液，每个样本加入100μl反应液（充分混匀，现配现用）。
组分
检测样本
阴性对照
tdt equilibration buffer
70 μl
80 μl
labeling solution
20 μl
20 μl
tdt enzyme
10 μl
0 μl
注：
① tdt equilibration buffer 使用前，室温静置直至wan全溶解。冰冻的平衡液融化后可能会出现钴盐结晶，此为正常现象。使用前涡旋混匀。
② labeling solution 使用前，请置于冰上溶解，待wan全溶解后离心，用枪头吹打混匀。
③ tdt enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°c，使用前取出，使用后立即放回。
④ 配制标记工作液时，建议不要涡旋。
9. 37°c 避光孵育60 min（每 20 min 轻轻摇晃混匀细胞）。
10. 加入1ml stop solution轻轻吹打混匀，室温静置5 min，加入 300~500 μl pbs(含 1%bsa)，600×g离心 5 min，弃上清。
11. 加入 200 μl pbs（含 1%bsa）重悬细胞，上机检测。
更多有关elabscience一步法tunel流式凋亡检测试剂盒的使用方法，请联系elabscience试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司。
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