小鼠ELISA检测试剂盒试验标本收集事项

做elisa实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
一、标本收集注意事项:
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。
7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的:
二、标本处理办法:
1.血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用edta,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离
心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)
保存。
3.组织匀浆:切取组织块,0.01mpbs中过洗一次;按照1g组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。
注:样品稀释的一般原则。
elisa实验加样时可能遇到的问题:
1、过长(特别是室内温度较高时)。
2、手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间。
3、加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外,血清或血浆标本分离不好即进行加样。
elisa实验相应解决办法:
1、标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟。
2、标本为血浆:须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟。
3、若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
4、加样后及时放入孵箱。
5、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
6、如果采用at或其他全自动加样,选择fame或其他后处理仪器加酶试剂。
7、标本较多时,请分批操作。

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