荧光pcr检测试剂盒的操作流程与检测方法!
荧光pcr检测试剂盒采用荧光pcr技术,通过荧光信号的变化检测犬线粒体基因的特异性序列。该试剂盒适用于鉴定多种样本中是否含有犬源性基因成份。
作用原理:所谓实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光pcr检测试剂盒具体的操作流程:
1、整个检测过程应严格按照本手册的要求在试剂制备区、样品处理区和pcr扩增区进行。各区域的实验服、仪器和耗材应单独使用,不得混用;实验中采用了带滤芯的吸头;样品处理区应配备生物安全柜,在其中进行样品处理;三个区域应配备紫外线消毒装置。
2、为避免rna降解,样品处理过程应在0-4℃下进行,实验完成后应立即进行计算机检测;样品处理中使用的仪器和耗材应在不含核酶的情况下进行处理。
3、应为每个实验设置阴性和阳性对照。
4、试剂盒中的所有试剂在使用前应在室温下充分熔化和混合,并应立即离心。
5、试剂盒中的所有阴性和阳性对照品应转移到样品制备区,并在使用前单独储存。
6、为了防止荧光干扰,必须避免徒手直接接触pcr反应管,并避免pcr反应管上的任何标记。
7、仪表放大的相关参数应根据本手册的相关要求进行设置;不同批号的试剂不能混合。
8、在实验过程中,产品废弃物应在丢弃前进行无害化处理。
荧光pcr检测试剂盒检测方法的局限性有什么?
1、样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
2、样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
3、阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
4、病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
5、不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
6、试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
7、本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
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