中国台湾师大林豊益：TRPV4通过硬骨鱼催产素途径调节斑马鱼离子平衡
《生物多样性研究基金》申报通知
nmt作为生命科学底层核心技术，是建立活体创新科研平台的*技术。2005年~2020年，nmt已扎根中国15年。2020年，中国nmt销往瑞士苏黎世大学，正式打开欧洲市场。
基本信息
主题：trpv4（一种nscc）通过硬骨鱼催产素途径调节斑马鱼离子平衡
期刊：am j physiol regul integr comp physiol
影响因子：3.176
研究使用平台：nmt斑马鱼创新科研平台
标题：transient receptor potential vanilloid 4 modulates ion balance through the isotocin pathway in zebrafish (danio rerio)
作者：中国台湾师范大学林豊益、刘咸台
检测离子/分子指标
h+
检测样品
斑马鱼卵黄囊的h+-atpase富集细胞（hr细胞）
中文摘要（谷歌机翻）
—硬骨鱼催产素通过调节离子细胞（也称为富线粒体细胞或氯化物细胞）的功能来控制离子调节。但是，关于硬骨鱼催产素蛋白系统的上游分子知之甚少。在本文中，我们确定了瞬态受体电位香草酸4（trpv4），其调节硬骨鱼催产素的mrna和蛋白质表达并通过硬骨鱼催产素途径影响离子调控。双重免疫组织化学结果显示，trpv4在成年斑马鱼脑下丘脑的同种异能神经元中表达。为了进一步阐明trpv4的作用，我们操纵了trpv4蛋白的表达并评估了其在斑马鱼胚胎中的离子调节功能。用吗啉代寡核苷酸敲低trpv4基因可降低整个幼虫的离子含量（na+，cl-和ca2+）和斑马鱼幼体皮肤的h+分泌功能。在trpv4突变体中，也抑制了离子细胞相关转运蛋白的mrna表达，包括h+-atpase，上皮ca2+通道和na-cl协同转运蛋白。trpv4敲除后，斑马鱼幼虫皮肤中的离子细胞（富含h+-atpase的细胞和富含na-k-atpase的细胞）和表皮干细胞的数量也减少了。我们的结果表明，trpv4通过硬骨鱼催产素途径调节离子平衡。
离子/分子流实验处理方法
对受精后三天的斑马鱼进行trpv4敲除。
离子/分子流实验结果
通过nmt分析了斑马鱼幼体卵黄囊的酸分泌。在卵黄囊表面记录到了代表酸分泌的h+外排。在trpv4突变体中酸分泌分别下降了21.9％和67.6％，这表明卵黄囊（左图）和hr的细胞（右图）的酸分泌受到抑制。
其他实验结果
trpv4是由斑马鱼大脑中的isotocinergic神经元表达的
western blot分析表明，在对照组中，抗trpv4抗体识别出一条98kda的trpv4蛋白带。在0.5ng trpv4-吗啉修饰反义寡核苷酸1（mo1）突变体中，该条带较微弱。表明trpv4蛋白表达受trpv4 mo1的抑制
在trpv4突变体中，同位素的mrna和蛋白质表达均显着降低
注射trpv4mo 可显著降低斑马鱼胚胎的离子含量
用rt-qpcr法检测了trpv4突变体中h+-atpase（ha）、上皮ca2+通道（ecac）和na+-cl-共转运体（ncc）的mrna表达，发现ha、ecac和ncc基因表达分别下降了39%、42%和62%。
trvp4突变体中hr、na+-k+-tapase-rich（nar）细胞和p63细胞密度均降低，表明trpv4基因敲除了降低了表皮干细胞的数量。
结论
在本研究中，我们*证明，trpv4由斑马鱼下丘脑中的同位素神经元表达。trpv4表达功能的丧失降低了同位素mrna和蛋白表达，并减少了表皮干细胞和离子细胞的数量。我们还观察到在trpv4突变体中离子细胞的功能被下调。我们的研究结果表明trpv4充当调节硬骨鱼催产素功能的上游分子。
离子流实验使用的测试液
normal water, 300μmmops buffer, 0.1 mg/l ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate，ph7.0
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基本信息
主题：trpv4（一种nscc）通过硬骨鱼催产素途径调节斑马鱼离子平衡
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h+
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离子/分子流实验结果
通过nmt分析了斑马鱼幼体卵黄囊的酸分泌。在卵黄囊表面记录到了代表酸分泌的h+外排。在trpv4突变体中酸分泌分别下降了21.9％和67.6％，这表明卵黄囊（左图）和hr的细胞（右图）的酸分泌受到抑制。
其他实验结果
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在trpv4突变体中，同位素的mrna和蛋白质表达均显着降低
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结论
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离子流实验使用的测试液
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