激活素A(ACVA)测定试剂盒实验步骤

激活素a(acva)测定试剂盒实验步骤:石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ），每次10 min；3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddh2o 洗 2×2min；4.抗原修复： 根据抗体说明书方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddh2o 洗 2×2min，tbs 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）备注：有些抗原勿需修复，直接进入第 5 步封闭。5.封闭： 滴加试剂 b，37℃湿盒孵育 30 min；6.加一抗：滴加用试剂 c（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；7.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min）；8.封闭： 滴加试剂 b，37℃湿盒孵育 10 min；9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗（试剂 d），37℃湿盒中孵育30 min；10.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min）；11.封闭： 滴加试剂 tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；12.加 hrp-sa： 滴加用试剂 c 稀释的试剂 e（1：50~200，终浓度 5~20 nm），37℃湿盒中孵育 30min；13.洗涤： tbs-t 洗涤（3×5 min），tbs 洗涤（2×5 min）；14.显色：应用 dab 溶液（试剂 f）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像： 显微镜下观察成像。
关键词：显微镜

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