精品│翌圣ZymeEditor打造超高文库转化率T4 DNA Ligase
建库作为ngs测序的核心步骤，直接影响测序质量，文库转化率是评估文库质量的重要指标，高的文库转化率一定程度上意味着文库丰富度、测序数据均一性更好。常规t4 dna ligase催化dna的 3’-oh 和接头的5’-磷酸基团之间形成磷酸二酯键完成接头连接，但此过程中会出现片段自连，从而减低文库转化率，影响文库丰富度与测序质量。翌圣zymeeditor™酶改造平台对t4 dna ligase进行定向改造获得hieff®5' app t4 dna ligase（cat#14960es），该突变体只能以预苷化接头为底物进行接头连接，显著减少片段自连，提高文库转化率。
图1. ngs常规建库流程
产品特点
1、极低片段自连：只能以预腺苷化的接头为底物，极大降低片段自连。
2、超高接头连接效率：连接效率达95%以上。
3、严格质控：无切口酶、外切酶及rnase残留。
数据展示
1、连接效率达95%以上以100ng 170bp和300bp的模式片段为底物，使用hieff®5' app t4 dna ligase对合成的预腺苷化（app）接头进行接头连接，结果显示连接效率达95%以上，且片段自连占比极低。
图2. 以170 bp模式片段为底物连接效率检测
图3. 以300 bp模式片段为底物连接效率检测
2、无rnase 残留将2000 u hieff®5' app t4 dna ligase与底物rna孵育，琼脂糖凝胶电泳比较rna谱带变化。结果显示翌圣hieff®5' app t4 dna ligase无rnase残留。
图4. rnase残留检测c：阴性对照
3、无切口酶及外切酶残留
将200 u hieff®5' app t4 dna ligase与底物dna孵育，琼脂糖凝胶电泳比较dna谱带变化。结果显示翌圣hieff®5' app t4 dna ligase无切口酶残留。
图5.切口酶残留检测c：阴性对照
将2000 u hieff®5' app t4 dna ligase与底物dna孵育，琼脂糖凝胶电泳比较dna谱带变化。结果显示翌圣hieff®5' app t4 dna ligase无外切酶残留。
图6.外切酶残留检测c：阴性对照
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12902es
常规接头连接
hieff®quick t4 dna ligase
10301es
预腺苷化接头连接
hieff®5' app t4 dna ligase
14960es
文库扩增
hieff canace®pro high-fidelity dna polymerase(1 u/μl)
14382es
翌圣zymeeditor™酶改造定制服务
翌圣zymeeditor™是一个酶改造底层技术平台，它基于翌圣生物多年在分子酶改造领域中的技术积累与知识拓展，该平台已具备对多种酶的多种需求进行定向改造的能力。因此，zymeeditor™平台从2023年开始正式推出酶改造对外定制服务，可为各种应用领域（如医药、诊断、食品、化工等）的客户提供全套酶改造服务，也可以单独提供蛋白发酵及纯化工艺开发优化、规模化生产服务，以满足不同客户的需求，助力产业升级。
定制服务流程
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图2. 以170 bp模式片段为底物连接效率检测
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