ELISA法评价肠道免疫功能
elisa法评价肠道免疫功能
elisa 法评价肠道免疫功能是通过检测不同炎症蛋白如急性期炎症蛋白 mpo，血清淀粉样蛋白 saa 或细胞因子如 il-6，il-1b 等的表达水平。
器材：
组织匀浆器、酶标板、酶标仪。
试剂：
① 组织裂解液（200 mmol/l nacl，5 mmol/l edta，10 mmol/l tris，10% glycine，1 mmol/l pmsf，1 mg/ml leupeptide，28 mg/ml aprotinin；ph7.4）;
② pbs 缓冲液;
③ bca 蛋白浓度检测试剂。
④ elisa 试剂盒
步骤
elisa 法评价肠道免疫功能的基本过程可分为如下几步，以检测急性期炎症蛋白 mpo 为例：
a 取出目的肠道组织，在冰冷的 pbs 中纵向剪开，小心洗去腔内的消化液，在平板纸上吸去多余液体。
b 10 ml 圆底离心管中加入 1～2 ml 组织裂解液和漂洗后的肠组织，在冰浴状态下匀浆 30 秒。
c 冰上孵育 10 分钟，全部转移 1.5 ml ep 管中，4 ℃ 离心 15 分钟，转速 12000 r/min。
d 小心分离上清，使用 bca 法测定蛋白浓度。
e 测定浓度后的上清分装后 - 80℃ 保存或冰上等待，立刻用于 elisa 检测。
f 根据 elisa 试剂盒配备的标准实验步骤进行 mpo 的水平检测。如下图所示
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