小鼠糖蛋白130（gp130）elisa试剂盒操作步骤
小鼠糖蛋白130（gp130）elisa试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/l，120 ng/l ，60 ng/l，30 ng/，15 ng/l）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48t的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48t的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。 测定应在加终止液后15分钟。
phospho-androgen receptor (tyr363)磷酸化雄激素受体抗体
ankk1锚定蛋白重复结构域蛋白激酶ankk1抗体
phospho-alpha adducin (thr445)磷酸化内收蛋白抗体
annexin a11膜粘连蛋白11抗体
annexin a13膜粘连蛋白13抗体
phospho-acth (ser168)磷酸化促肾上腺皮质激素acth抗体
phospho-akt1 (ser246)磷酸化蛋白激酶akt1抗体
phospho-akt1/3 (tyr473)磷酸化蛋白激酶b抗体
phospho-alpha 1 sodium potassium atpase (tyr260) 磷酸化钠钾atp酶蛋白a1抗体
phospho-alpha adducin(ser436)磷酸化内收蛋白a1抗体
phospho-ampk alpha 1 (ser487)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
phospho-ampk alpha 2 (ser345)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体
asah1酸性神经酰胺酶1抗体
adrm1粘附调节分子1抗体
aphrodisin气味结合蛋白抗体
aldh2乙醛脱氢酶2抗体
annexin a10膜粘连蛋白10抗体
anterior gradient 2前梯度同源蛋白2抗体
aldh1b1乙醛脱氢酶5抗体
alf通用转录因子iia样因子抗体
atg4d自噬相关蛋白4d抗体
atg9a自噬相关蛋白9a抗体
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2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48t的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48t的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。 测定应在加终止液后15分钟。
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